Tolkning av PCR-resultater for tuberkulose

Tuberkulose er en spesifikk infeksjon, dets fokus kan være i humant vev i mange år, og deretter spre seg i flere måneder. Dette er en kronisk sykdom hvis optimal behandlingsregime er vanskelig å finne. En av grunnene til dette er sen diagnostikk, når mykobakterier, mens de er i menneskekroppen, allerede har tilpasset seg mange stoffer.

Hvilke moderne diagnosemetoder eksisterer? PCR diagnostikk - hva er det? Hvordan er denne undersøkelsen gjort? I hvilke tilfeller er tuberkulose diagnostisert av denne metoden og hva er dens essens?

Hva er PCR diagnose

Dette er en av de mest moderne metodene for å diagnostisere ikke bare sykdommer, men også påvisning av biologisk materiale. PCR-diagnostikk ble oppfunnet relativt nylig. For rundt 30 år siden i 1983 foreslo en amerikansk biokjemi, Carey Banks Mullis, et komplekst gjenopprettingskonsept for det biologiske materialet av mikroorganismer i ett kort segment. Takket være sin oppdagelse ble forskeren tildelt den høyeste prisen - Nobelprisen.

Hva er det - PCR diagnose av infeksjoner? Polymerasekjedereaksjon (PCR) er en diagnose av påvisning av virussykdommer, basert på gentekniske metoder. Det er mye brukt i medisinsk mikrobiologi, immunologi og virologi. Metoden er universell og hjelper til med å lage en diagnose med en liten mengde materiale. Identifiser infeksjonen kan være bokstavelig talt i de første timene av infeksjon med den, lenge før de første symptomene på sykdommen vises.

Metoden består i å skaffe fra materialet fra en syke person ikke selve patogenet, men fragmenter av genomet (DNA-partikler), dets biosyntese med påfølgende bestemmelse til hvilken klasse av mikroorganismer det oppnådde genetiske materialet tilhører ved hjelp av molekylære genetiske metoder.

Til tross for at dette er en kompleks prosess, tar det mye mindre tid enn mange biologiske metoder for å detektere smittsomme stoffer. Innen bare noen få timer kan en mikroorganisme detekteres av PCR. For å gjøre dette er det ikke nødvendig å isolere det fra miljøet (blod, cerebrospinalvæske, sputum) og vokse det lenge på kunstig næringsmedium. Det er nok at et lite fragment av DNA-strengen av det infeksiøse middel er til stede i materialet under studien.

Reaksjonsgrunnlaget er muligheten under kunstige forhold (in vitro) for å skape syntese av nukleinsyremolekyler av det smittefarlige middel.

Hva er nødvendig for PCR?

  1. Primers er DNA-segmentene hvorfra biosyntese eller skapelse begynner.
  2. Nukleotider eller komplekse forbindelser som er grunnlaget for et DNA- eller RNA-molekyl.
  3. Polymeraskjedereaksjonen er umulig uten nærvær av polymerase, som er et enzym som akselererer PCR.

Stadier av PCR-diagnostikk

Hvordan utføres molekylær diagnose av PCR? Prosedyren er enkel og tar kort tid, med tanke på samlingen av materiale.

  1. Før du starter studien, ta det nødvendige biologiske materialet - dette er bronkialt vaskevann, blod, mageinnhold og sputum. Typen av biologisk materiale er avhengig av det mistenkte patogenet.
  2. Denaturering eller ødeleggelse av den primære strukturen av DNA, som består av to kjeder. Essensen av dette stadiet er å skille de to kretsene under påvirkning av høy temperatur (maksimum er 98 ºC, som varer ikke mer enn to minutter).
  3. I neste fase av PCR, kalt annealing, blir temperaturen redusert med flere grader, slik at primeren vil binde seg til DNA-strengen.
  4. Forlengelse, hvor syntesen av de ønskede molekylene foregår direkte.

Som et resultat mottar bare 25-30 slike sykluser det nødvendige antall kopier av mikroorganismer DNA, som lett kan gjenkjennes.

Krever PCR diagnose av tuberkulose?

Det er ikke mulig for absolutt alle mennesker med mistanke om tuberkulose å utføre PCR, da metoden krever dyrt utstyr. Ikke alle offentlige klinikker har råd til å kjøpe den. I tillegg har det skjedd at de vanlige metodene for å diagnostisere en infeksjon i de fleste tilfeller også rettferdiggjør seg selv.

Disse inkluderer:

  • pasientundersøkelse, historieopptak;
  • full undersøkelse av personen
  • Forskning ved bruk av tuberkulinprøve Mantoux;
  • Røntgen eller fluorografi
  • datamaskin diagnostikk om nødvendig;
  • mikrobiologiske undersøkelsesmetoder: smear mikroskopi og sputum bakteriologisk undersøkelse.

PCR for tuberkulose utføres i spesielle tilfeller når det er vanskelig å foreta en diagnose eller det er ikke mulig å utføre andre instrumentelle metoder.

Til tross for overflod av diagnostiske metoder, fortsetter forekomsten av tuberkulose å vokse. For tiden er det ikke bare veksten, men også andre funksjoner:

  • sykdommen oppstår ofte i alvorlig form;
  • Antall dødelige tilfeller øker;
  • stadig mer resistente mot moderne kjemoterapi stoffer er diagnostisert.

Uvilligheten til folket selv å gjennomgå rutinemessige medisinske undersøkelser årlig, fører avvisningen av vaksinasjon til spredning av tuberkulose. Under slike forhold er det behov for raske, informative og effektive forskningsmetoder, som bør være tilgjengelige for barn og voksne. Alle de ovennevnte diagnostiske metodene er mye dårligere enn PCR.

Fordeler med å diagnostisere tuberkulose med PCR

Denne undersøkelsen, men ny, har vist seg godt, spesielt i kontroversielle tilfeller der det er umulig å diagnostisere av flere grunner.

Takket være PCR er det mye lettere å oppdage tuberkulosepatogenet i testmaterialet.

Fordelene ved PCR-diagnostikk er som følger.

  1. Dette er en rask analyse. Et lite fragment av DNA-molekylet kan brukes til å diagnostisere på bare noen få timer (ca. fem), som vellykket brukes i nødsituasjoner når det for eksempel før en operasjon er nødvendig å avgjøre om en person er syk med tuberkulose.
  2. PCR-analyse er tillatt i tilfelle når andre metoder er utilgjengelige eller forbudte (for påvisning av pulmonell tuberkulose, er det noen ganger nødvendig å ta flere radiografiske bilder, noe som vil gi en stor dose stråling).
  3. Ved hjelp av PCR undersøkes ethvert biologisk miljø for forekomst av et patogen i den. For eksempel kan du gjennomføre en studie av cerebrospinalvæske hvis det er mistanke om tuberkuløs meningitt.
  4. Tillatt PCR diagnose av smittsomme sykdommer hos barn, fordi metoden er trygg.
  5. Tillater deg å identifisere patogenet i et hvilket som helst stadium av sykdommen.
  6. Den høye følsomheten til PCR gjør det mulig å oppdage Mycobacterium tuberculosis, selv om det bare er noen få mikroorganismer i det biologiske materialet.
  7. Det er godt å utføre for diagnostisering av sykdomstilfelle.

Etter alt lest PCR virker nesten perfekt diagnostisk metode, som bør gjøre for alle med mistanke om tuberkulose. Men det er også ulemper her, de må vurderes.

Ulemper med PCR ved diagnose av tuberkulose

I vår tid er slike diagnostikk mer sjeldne enn regelmessighet. Og for dette er det grunn.

  1. Dette er en kostbar forskningsmetode. På mange klinikker er utstyr for PCR fraværende på grunn av høye kostnader, men analysen kan fortsatt gjøres i betalte laboratorier.
  2. Umiddelbart etter behandling kan døde mykobakterier eller lever i små mengder fortsatt være tilstede i kroppen (resultatet vil være positivt under PCR-diagnostikk), slik at metoden vil være unøyaktig på dette tidspunkt, er det ikke noe fornuftig å utføre det.
  3. Mutasjoner av mykobakterier resulterer i ineffektiv PCR - en normal DNA-strengssekvens kan ikke syntetiseres.
  4. Det er nødvendig å velge riktig miljø for studien, blod tas kun hvis det er mistanke om å bli smittet (sepsis), det er ikke nødvendig å ta sputum hvis det er et spørsmål om tuberkulose i nervesystemet. I dette tilfellet vil PCR ikke være i stand til å oppdage patogenet og diagnosen vil være uninformativ.

Indikasjoner for påvisning av tuberkulose ved bruk av PCR analyse

PCR diagnostisering av tuberkulose utføres oftest i kontroversielle tilfeller. Når refererer leger denne studien?

  1. Hvis det er vanskelig å gjøre en diagnose ved hjelp av de vanlige tilgjengelige metodene, men det var kontakt med en pasient med tuberkulose.
  2. I tilfelle når det er umulig å levere en person til en polyklinisk for en rutinemessig rutinemessig undersøkelse for tuberkulose, er det lettere å undersøke ham ved bruk av PCR, fordi sputum for undersøkelsen kan leveres i en krukke, og diagnosen er bekreftet innen få timer.
  3. Hvis en person skal ha en nødoperasjon, og det er presserende å finne ut om han er syk med tuberkulose.
  4. Om nødvendig er en gravid kvinne også bedre å skjerme for tuberkulose ved å bruke PCR, siden metoden er trygt.
  5. På en betalt basis kan alle som ikke har bekreftet tuberkulose med bakteriologiske metoder og fluoroskopi, gjennomgå diagnose. Dette skjer når lesjonen i lungene er umerkelig i det direkte bildet, og personen under levering av sputum til studien kunne ikke følge anbefalingene for korrekt samling av materiale. I dette tilfellet er en person bekymret for alle symptomene som er karakteristiske for lungetuberkulose.
  6. Når det er tvil om resultatene av Mantoux-testen.
  7. Det er foretrukket å gjøre PCR-diagnose av tuberkulose hos barn. Prosedyren er trygg, skaper ikke ytterligere strålingseksponering, og er effektiv til å oppdage vanskelig å diagnostisere sykdomsformer.

Tidlig diagnose av tuberkulose er nøkkelen til ordentlig foreskrevet behandling og redusere spredning av sykdommen. Ofte er kjente sykdomsdetekteringsmetoder ikke alltid effektive. Derfor er PCR i dag en av de mest pålitelige og sikre måtene å oppdage infeksjon i de tidlige stadiene av utviklingen.

PCR diagnose av tuberkulose hos barn og voksne

Moderne diagnostiske metoder (PCR, diaskintest, quantiferon test) er svært effektive, men i praksis har studiene ikke blitt verifisert. Tuberkulin diagnose var grunnlaget for å identifisere infiserte og syke mennesker.

Metoden tillot å identifisere mange syke mennesker, redusere statistikken om sykelighet, dødelighet.

Såing mykobakterier og sputummikroskopi i henhold til Zil-Nelson, gjør at du på en pålitelig måte kan diagnostisere infeksjonen. Problemet medfører at eksakt tar sputum direkte fra berørt bronkus. På bakgrunn av tuberkuløs prosess, påvirkes en betydelig del av bronkialtreet. Etter bakteriell inokulasjon er det mulig å teste for patogenes følsomhet overfor antibiotika.

Etter å ha analysert resultatet av diagnostikk av fisiater, ble det klart at mangelen på utskillelse av Kochs pinner ikke betyr fravær av infeksjon i kroppen. Kausjonsmiddelet kan bestemmes etter det andre, tredje, fjerde tar materialet.

Moderne diagnostiske metoder (dst, Quantiferon test) oppdager mykobakterier med et aktivt sykdomsforløp. I nærvær av mykobakterier inne i lymfeknuter, med ekstrapulmonale former av sykdommen, er testene oftest negative.

Tidlig diagnose er grunnlaget for å forebygge alvorlige komplikasjoner og farlige konsekvenser av sykdommen.

Moderne metoder

Erstatning av klassisk tuberkulindiagnose er diaskintest (dst). I følge de siste regelene bør studien erstatte standard Mantoux-testen, som gjorde det mulig å identifisere mange tilfeller av sykelighet og infeksjon blant befolkningen.

Essensen av Diaskintest, samt tuberkulindiagnose, involverer subkutan administrering av proteiner av patogener av tuberkulose. Som respons på injeksjonen utvikles en overfølsomhetsreaksjon med spesifikke hudforandringer: rødhet, indurasjon, blæring.

Et positivt resultat av Diaskintest er typisk for pasienter med aktiv sykdomssykdom. Hvis infisert eller økt allergiseringsstudie vil være negativ. Den negative effekten av dst kan være et resultat av sterk immunitet, men når den er smittet med en person.

Sammenlignet med Mantu er Diaskintest en mer allsidig og sensitiv måte å diagnostisere tuberkulose på. Fraværet av deteksjon av infeksjon krever bruk samtidig med tuberkulindiagnose.

Til tross for resultatene av kliniske studier dst, argumenterer forskere om den generelle allsidigheten og følsomheten til metoden, kan studien ikke betraktes som en universell diagnostisk løsning.

En test har blitt utviklet av akademikere fra Sechenov Research Institute. Fraværet av allergier ved bruk av diaskintest skyldes subkutan administrering av artsspesifikke tuberkuloseproteiner. Etter introduksjonen bestemmes det av hudreaksjonen i form av rødhet, seler.

Hva er kvantiferon test

Quantiferon-testen blir evaluert etter å ha tatt pasientens blod. Prosedyrens mekanisme er å bestemme gamma-interferon, som frigjøres av T-lymfocytter etter møtet med mycobakterie tuberkulose. Testene bestemmer tuberkulære proteiner som ikke bare inneholder humane og bovine bakterier. Quantiferon-testen kan også brukes til å diagnostisere mykobakterier forårsaket av andre mykobakterier som danner spesifikke endringer på røntgenstrålen. Testresultatet bestemmes i flere reagensrør, noe som øker metodens diagnostiske følsomhet.

PCR for diagnose av barndoms tuberkulose

Polymerase kjedereaksjon er en nøyaktig men dyr metode for å diagnostisere tuberkulose. PCR utføres etter bronkoskopi.

Det er rasjonelt å gjennomføre en polymerasekjedereaksjon etter å ha mottatt negative resultater. Resultatene blir evaluert etter tre-tiden sputumkulturen av Mycobacterium tuberculosis. Under de gunstigste forhold indikerer identifikasjonen av patogenet infeksjon. Formålet med kjemoprofylakse gjør at du kan unngå aktiv tuberkuløs prosess i nærvær av Koch-pinner.

Ved mottak av en stamme av en mikroorganisme er det mulig å såle på antibiotikaresistens. Bestemmelse av antibiotika som kan drepe mikroorganismer, tillater oss å vurdere hvilke legemidler som skal behandle infeksjonen.

PCR hos barn utføres med negative resultater av såing, men hvis det er en tuberkulinprøving, visualisering av røntgenfeil på infeksjon, identifisering av kliniske symptomer på gjeldende infeksjon.

Polymerasekjedereaksjonen gir høy nøyaktighet (ca. 99%). Metoden er basert på nukleinsyreamplifisering. Mykobakterier, virus og andre mikroorganismer har unike nukleotidsekvenser. Deres diagnose gjør det mulig å identifisere årsaken til sykdommen.

Sensibiliteten til PCR hos barn er mindre lav enn hos voksne. I praksis ble følgende egenskaper av polymerasekjedereaksjonen i et barn avslørt:

  1. Specificitet - 80-100%;
  2. Følsomhet - 25-80%.

Til tross for metodenes høye nøyaktighet betyr ikke å oppnå et negativt resultat fravær av tuberkulose hos barn. En mer rasjonell bruk av metoden hos pasienter med immunsviktstilstander. Ved diagnosen ekstrapulmonal tuberkuloseinfeksjon.

Tolkningsfeil bestemmes av brudd på innsamling og forberedelse av materiale til studien.

Årsakene til det negative resultatet av PCR ved diagnosen tuberkulose

Spredningen av mykobakterier i kroppen ved lymfogen (gjennom lymfekarene) og hematogen (gjennom blodbanen) sikrer kolonisering av mange vev og utseendet av ekstrapulmonale infeksjonsfokus.

Når røntgenbestemmelse av ødeleggelse (ødeleggelse) i lungene er det ikke nødvendig med PCR. Hos voksne, ved hjelp av radiografi, er det mulig å identifisere løpeskjemaene med høy grad av selvtillit.

Hos barn brukes PCR-studien oftere på grunn av latent lokalisering av mykobakterier inne i lymfeknuter, noe som fører til negative resultater ved bruk av andre diagnostiske metoder. Med bakteriekultur er det tilstrekkelig å oppdage om lag 10 mikroorganismer. Det må tas i betraktning at ikke alle er ansvarlige for aktiv lungetuberkulose.

For riktig diagnose av PCR, bakteriell såing, DST må følgende krav observeres:

  1. Lagre materiale i sterile rør;
  2. Eliminer oppføring av andre bakterier;
  3. Når du transporterer, følg personlig hygiene for å forhindre at biomaterialet kommer på kropp, ansikt og luftveier.

Lagret blod med konserveringsmiddel EDTA. Det er unike egenskaper ved fremstillingen av materialet for hver laboratorieanalyse, som eksperter er kjent med.

Innovative diagnostiske metoder

Tidlig gjenkjenning av infeksjon tillater tidsriktig kjemoprofylakse, for å forhindre alvorlig sykdom.

Sletting av klinikken i barndommen, utilstrekkelige testresultater, analfabetisk tolkning av evalueringen av prøver tillater ikke rettidig bekreftelse av infeksjonen. For å forhindre spedbarns sykelighet, er det nødvendig med en nøye analyse av resultatene, med mulighet for å etablere en diagnose på et tidlig stadium.

Moderne metode for laboratoriediagnostisering av tuberkulose hos barn - deteksjon av TAB-TM

Reaksjonen på definisjonen av en T-celle markør hos barn kalt "TAB-TM" karakteriseres av høy følsomhet. Essensen av metoden består i identifisering av en bestemt differensieringsklasse (CD-27) lokalisert på overflaten av T-lymfocytter. Etter isolering av denne faktoren er cytokiner farget med cytometri.

Metoden i litteraturen begynte å bli beskrevet i 2014. Resultatene av observasjoner indikerer en høy følsomhet for metoden. Bestemmelsen av TAB-TM er en eksplisitt metode for diagnostisering av tuberkulose ved sputumundersøkelse.

En blodprøve for tuberkulose - som viser

I begynnelsen skjer tuberkuloseinfeksjon uten spesifikke kliniske symptomer. Laboratoriediagnose hos barn blir mulig når Koch-trollet multipliserer.

Hvilke celler evalueres i en tuberkuløs prosess i en laboratorieblodtest:

  1. Røde blodlegemer er røde blodlegemer som er ansvarlige for å transportere oksygen til vevet. Med en lett løpet av lungetuberkulose fra siden av den røde spire av blod, er det ingen patologiske forandringer. Tilstedeværelsen av et destruktivt fokus bidrar til blødning med blodanemi. Tilstanden utvikler seg med tuberkuløs betennelse i tarmveggen. Antall retikulocytter på bakgrunn av patologien øker mer enn 1%;
  2. Leukocytter øker med enhver infeksjon. Leukocytose ledsages av et skifte av leukogrammet til venstre. Økningen i antall segmenterte nøytrofiler kan spores i begynnelsen. Ved alvorlig tuberkulose med purulent fusjon, immunodefekter, observeres leukopeni (en reduksjon i antall blodleukocytter). Samtidig øker innholdet av lymfocytter (over 20%);
  3. Eosinofili kan spores til første fase. Tilstanden oppstår når tuberkuløs infiltrerer av ulike organer. Alvorlig tuberkulose med disintegrasjon hos voksne fører til fullstendig fravær av eosinofiler;
  4. Basophil ekstrautstyr.

Laboratorietesting for tuberkulose er ikke spesifikk for barn eller voksne. Slike endringer er karakteristiske for mange bakterielle eller virusinfeksjoner.

Hemogram indikatorer gir interesse for phthisiatricians å bestemme stadium av tuberkuløs infeksjon.

Med aktiv infiltrering kan leukocytose spores på grunn av økning i antall nøytrofiler. Patologisk grit vises i cellene, noe som indikerer blodforgiftning.

Sentralene for oppløsning fører til en nedgang i antall eosinofiler, nøytrofiler, unge former, lymfocytter. Når formidling oppstår, opptrer absolutt monocytose. Mot resorpsjon øker antall lymfocytter og eosinofiler.

Ved konsolidering av sentrene er hemogrammet ikke preget av endringer.

Barntest for tuberkulose: tuberkulin diagnose

I lang tid arrangerte fisiatrikere Mantoux-reaksjonen. Slike tester for tuberkulose gjorde det mulig å oppdage ikke bare aktiv infeksjon, men også infeksjon. Essensen av prøven var subkutan injeksjon av tuberkulin - et stoff som forårsaket kroppens allergi. Deigen brukte materiale hentet fra Micobacterium Bovis. Etter en subkutan injeksjon oppnås en papule som reflekterer kroppens respons på penetrasjon av mykobakterier:

  1. Normal papule - størrelse fra 5 til 16 mm;
  2. I fravær av en reaksjon - svekkelse av immunsystemet, fraværet av mykobakterier;
  3. Stor papule - tilstedeværelsen av bakterielle antigener, i kontakt med en bærer av tuberkelbaciller.

Metoden regnes ikke som pålitelig på grunn av det store antall falske positive reaksjoner. Når tvilsomme resultater krevde bekreftelse PCR. Med fremkomsten av diaskintest (dst) har situasjonen endret seg. Den kombinerte bruken av metoder gjør det mulig å oppnå mer pålitelige resultater.

Klassiske "fisiologiske" måter å diagnostisere tuberkulose

Fysiater for diagnose av tuberkulose hos barn og voksne bruker følgende tester:

  • Studie av pasientens historie (kontakt med pasienten eller bæreren av tuberkelbacillus). Identifisere sosiale risikofaktorer bidrar til å foreslå mulig infeksjon;
  • Vurdering av tuberkulinfølsomhet (Mantoux test) med PPD tuberkulin i en dose på 5-10 TE. Evaluering av resultatet utføres i 48-72 timer;
  • Røntgenundersøkelse utføres hos barn og voksne med mistanke om tuberkulose, en bøyning av tuberkulinprøver;
  • Bakteriologisk kultur er uopprettelig bevis på infeksjon forårsaket av Mycobacterium tuberculosis. Med riktig sputuminnsamling, deteksjon av patogenet i vasken i magen, kan tester for tuberkulose betraktes som positive. Kochs vegg finnes i purulente abscesser, lymfeknuter, ascitisk effusjon, pleural ekssudat, urin, cerebrospinalvæske;
  • Erytrocytt sedimenteringshastigheten øker med enhver infeksjon, inkludert tuberkulose;
  • PCR lar deg identifisere et bestemt patogen, men studien er dyrt;
  • Diaskintest bestemmer lungetuberkulose, men gir ofte negative resultater i ekstrapulmonal lokalisering av infeksjonen.

Moderne diagnostisering av tuberkulose ved bruk av et kompleks av metoder gjør det mulig å bestemme mykobakteriet i kroppen med høy grad av pålitelighet. Ved å bruke eksisterende metoder, oppdages en aktiv prosess eller infeksjon. Vi trenger bare tid til å kontakte ekspertene!

Fordeler og ulemper ved PCR (a) for diagnose av tuberkulose

En spesifikk tuberkuloseinfeksjon har vært tilstede i menneskelige vev og strukturer i mange år, og under visse omstendigheter sprer det seg raskt gjennom kroppen i 2-3 måneder. Noen ganger er det svært vanskelig å velge det optimale behandlingsforløpet på grunn av sen diagnostisering og tilpasning av patogenet til mange medisiner.

Den nyeste PCR-diagnosen av tuberkulose bidrar til å oppdage ikke bare den utviklede sykdommen, men også selve patogenet, når de første tegn på sykdommen ennå ikke har oppstått.

Hva er PCR?

Diagnose av tuberkulose ved PCR har dukket opp nylig. I 1983 oppfunnet en mikrobiolog fra Amerika, Cary Mullis, en prosedyre hvor mikroorganismer kunne rekonstrueres fra biologisk materiale i et kort segment. Dette arbeidet har oppnådd Nobelprisen.

PCR for tuberkulose er en polymerkjedeprosess der diagnose og deteksjon av virale patogener ved genteknologi. Teknikken brukes i immunologiske, mikrobiologiske, virologiske og biokjemiske laboratorier.

Den universelle metoden hjelper leger diagnostisere og oppdage infeksjonsprosessen selv etter de første infeksjonstidene, lenge før symptomene begynner. Forskning er mulig selv med en liten mengde biomaterialer.

Hva trengs for analyse?

  • Flere stykker DNA (primere), med hvilken biologisk syntese begynner;
  • Nukleotidforbindelser, grunnlaget for DNA-molekylet eller RNA;
  • Et polymeraseenzym som akselererer PCR-analyse.

Hva er grunnlaget for metoden?

Først blir et segment av DNA ekstrahert fra et biomateriale fra en infisert person ved bruk av genmolekylære biosyntesemetoder, hvilken type mikroorganismer som biofragmentet tilhører, er ytterligere bestemt.

Denne komplekse reaksjonen tar mindre tid enn noen biometoder. PCR bestemmer patogenet om noen timer, mens det ikke er behov for å isolere det fra en biologisk væske (sputum, cerebrospinal eller blodmedium), er det ikke nødvendig å dyrke det lenge i næringsmedium. Det er nok at det studerte materialet inneholder en DNA-streng av et smittsomt patogen.

Ved utførelse av en PCR-blodprøve for tuberkulose in vitro, opprettes syntesen av ribonukleinsyrer av mycobacterium tuberculosis kunstig.

Stadier av diagnose

Molekylær reaksjon ved PCR er en enkel prosedyre som tar lite tid. Det nødvendige biomaterialet er tatt: blod, sputum, bronkial vaskevæske brukes til å bestemme tbc.

  1. For det første blir den primære formen for DNA ødelagt, 2 kjeder separeres ved høy temperatur (maksimalt 98 ° C i ikke mer enn 2 minutter);
  2. Da utglødning utføres, blir den primære temperaturen redusert med flere divisjoner, DNA-strengen er forbundet med primeren;
  3. Den neste fasen kalles forlengelse, med biosyntese av nødvendige molekylære strukturer.

For å oppnå det nødvendige antall kopier av DNA, må 25 til 30 slike sykluser passere, og det resulterende antall mykobakterier blir lett gjenkjent.

Er det nødvendig å gjøre PCR for tuberkulose?

Direkte til alle pasienter med mistanke om TVC, er kjedediagnosen ikke ferdig, da prosedyren krever bruk av dyrt utstyr. Ikke alle medisinske statlige institusjoner tillater det å bli kjøpt, særlig siden de vanlige metodene for å diagnostisere mycobacterium tuberculosis er også informativ.

  • Forsiktig å ta vare på anamnesen, forhør av pasienten;
  • Visuell inspeksjon;
  • Mantoux tuberculin test;
  • Radiografisk eller fluorografisk undersøkelse;
  • Om nødvendig, datamaskindiagnostikk;
  • Mikroskopisk eller bakteriologisk undersøkelse av masken med sputum.

PCR for tuberkulose utføres bare når det ikke er mulig å utføre en annen instrumentanalyse eller under vanskelige forhold.

Til tross for at de har oppfunnet et stort utvalg av diagnostiske metoder, fortsetter antallet pasienter med tuberkulose å vokse. I tillegg har forekomsten fått noen egenskaper: En alvorlig form for sykdommen blir ofte observert, antall dødsfall øker, patogenet blir resistent mot eksisterende kjemoterapi medikamenter.

Mange mennesker vil ikke gjennomgå en rutinemessig inspeksjon hvert år, nekte vaksinasjon, noe som fører til økt forekomst. Slike omstendigheter krever effektive og informative forskningsmetoder tilgjengelig for voksne og barn diagnostisert med tbc. PCR har fordeler i forhold til andre diagnostiske metoder.

Hva er verdien av metoden?

Denne siste undersøkelsen har vist seg godt. Hvis det av en rekke årsaker er vanskelig å foreta en diagnose eller, i noen kontroversielle tilfeller, registrerer PCR tuberkelbacillusen lettere i biologisk materiale enn andre metoder.

  • Denne raske studien, et lite segment av molekylet, gjør det mulig å foreta en nøyaktig diagnose på kort tid om ca. 5 timer. Dette brukes i nødstilfeller, for eksempel før et akutt kirurgisk inngrep;
  • En blodprøve for tuberkulose er mulig når andre metoder er utilgjengelige eller kontraindisert - noen ganger for påvisning av tbc-patogenet må mange Rg-skudd tas, strålingsdosen er for stor;
  • Ved hjelp av polymerasereaksjonen kan eventuelle biologiske væsker undersøkes for nærvær av mykobakterier. For eksempel kan du gjennomføre en studie av cerebrospinalvæske i tuberkuløs meningitt eller urin i urogenitalt tuberkulose;
  • Metoden er trygg, diagnosen tuberkulose hos barn som bruker PCR, forårsaker ikke vanskeligheter.
  • Metoden for polymerreaksjon avslører en tuberkelbacillus i enhver form og fase av sykdommen;
  • Tilstedeværelsen av bare noen få bakterier i biomaterialet lar deg se tilstedeværelsen av mikroorganismer, da dette er en sensitiv reaksjon;
  • PCR diagnostiserer enkelt sykdommenes gjentakelse.

Til tross for det store antallet fordeler, er alle pasienter med mistanke om tbc-studier ikke ferdige, siden det også er ulemper, tas de også i betraktning.

video

Video - tidlig diagnose

Hva er ulempene?

Denne metoden for diagnose er ganske eksepsjonell enn naturlig, for dette er det grunner. Først og fremst blir høye kostnader ved metoden tatt i betraktning. Utstyret er dyrt, offentlige klinikker har ikke mulighet til å kjøpe det på grunn av den høye prisen, men de fleste betalte laboratorier har utstyret, analysen er gjort i dem.

  • Metoden oppdager døde bakterier som har dødd etter behandling, mens PCR viser et positivt resultat. Umiddelbart etter kjemoterapi, gir det ingen mening å gjennomføre en studie, siden resultatet vil være upålitelig;
  • Mycobacterium tuberculosis mutasjoner er mottakelige, noe som fører til ineffektivitet av metoden, og DNA-strengen kan ikke syntetiseres konsekvent.

Miljøet for studien bør velges nøye; blod eller urin kan bare samles hvis det er mistanke om infeksjon. Phlegm bør ikke tas til undersøkelse dersom bein tuberkulose mistenkes. I denne situasjonen vil diagnosen være feil.

Blodet og urinen til en pasient med tuberkulose som skal studeres på PCR tas sjelden, identifikasjonen av sykdommen på denne måten er tvilsom. I disse biomediene bestemmes patogenet bare i sepsis, eller i tilfelle spredt tuberkulose. Lokale former er mest vanlige, med blod og urin kan forbli uendret. Oftest er sputum tatt for undersøkelse.

Hvem viser analysen?

De fleste pasienter sendes til PCR-diagnose i kontroversielle og vanskelige tilfeller av tuberkulose. Når utsteder medisinske henvisninger henvisninger til forskning?

  1. Hvis det er kontakt med en person som har blitt pålitelig diagnostisert med tuberkulose, men det er vanskelig å diagnostisere ved hjelp av konvensjonelle metoder.
  2. Under slike omstendigheter er pasienten til å gi klinikken umulig for radiografi eller andre studier. I en slik situasjon er det lettere å inspisere det ved hjelp av polymermetoden. Sputumanalyse leveres bare til laboratoriet i en spesiell beholder, og resultatet blir kjent etter noen få timer.
  3. Før operasjonen er det viktig å avgjøre om pasienten er syk med tuberkulose, i hvilket tilfelle PCR er indikert;
  4. På grunn av metodens sikkerhet er det mulig å gjennomføre en undersøkelse av en gravid kvinne eller et barn, uten å skape en ekstra røntgenbelastning;
  5. Tvilsomme Mantoux testresultater.

Alle som ønsker kan bli undersøkt for en avgift dersom tuberkulose ikke er bekreftet ved hjelp av bakteriologi og fluoroskopi. Dette skjer hvis lesjonen i lungevevvet er usynlig i Rg-bildet i en direkte projeksjon, og pasienten er ikke i stand til å samle sputum riktig, men tegn på menneskelig tuberkulose forstyrres.

Moderne PCR-reaksjon for diagnose er nøkkelen til vellykket behandling, som et resultat av hvilken forekomsten av sykdommen minker. Tradisjonelle metoder for å identifisere plager gir ikke alltid den ønskede effekten.

Så PCR analyse til dags dato har blitt en av de pålitelige og sikre diagnosemetodene i de tidlige stadiene av sykdommen.

PCR analyse for tuberkulose

PCR-analyse for tuberkulose er den mest populære blant medisinsk forskning innen denne sykdommen.

Men hvordan å advare deg selv og dine kjære fra denne forferdelige sykdommen? Hvordan bestå de nødvendige testene for PCR?

Symptomer på tuberkulose og dens forebygging

Eksperter sier at ca 30% av den totale befolkningen lider av tuberkulose.

Den høyeste prosentandelen av sykdommen er utviklet i uutviklede land. Dette oppstår ofte som følge av redusert immunitet hos mennesker.

Sykdommen er en av de eldste. Denne sykdommen finnes i foringen av hjernen, i fordøyelseskanalen, på leddene og ryggraden, i urinsystemet og i små flekker på menneskelig hud.

Spesialister er det enkleste å bestemme den berørte huden. På stedet er det små tetninger, som over tid øker i størrelse, brister ut med hvitaktig væske.

Den forårsakende agenten av tuberkulose kan oftest bli plukket opp når du snakker med en syk person, når han hoster eller nyser. Vanligvis går sykdommen uten symptomer eller har en åpen form, men PCR-diagnose av tuberkulose gjør det mulig å oppdage det i tidlige stadier og i nødstilfeller.

Symptomer på sykdommen: langvarig våt hoste, feber, kuldegysninger, overdreven svette om natten, et kraftig tap i vekt, følelse av tretthet og svakhet.

Den åpne formen av sykdommen er den farligste. En person som lider av tuberkulose, er i stand til å infisere friske mennesker.

Det viktigste symptomet på lungesykdom er hemoptysis. Det forekommer i noen form av sykdommen.

I noen situasjoner kan dette føre til blødning fra en persons lunger. Det er veldig farlig og krever akutt medisinsk inngrep.

For forebygging og anerkjennelse av tuberkulose foreskriver eksperter: en prøve - en tuberkulinprøve, en undersøkelse av biologisk materiale, fluorografi, røntgenstråler og en blodprøve, sputum eller spytt.

Diagnose av sykdommen

Forbedret diagnose av sykdommen - den er korrekt og i løpet av behandlingen startet. I de fleste tilfeller har de vanlige metodene for å oppdage patogener ikke alltid en effekt og er allerede utdaterte.

Den viktigste måten å identifisere og diagnostisere lungesykdom er medisinsk undersøkelsestest. Bruk vanligvis PCR-diagnostikk. Denne undersøkelsen ble oppdaget ganske nylig, i 1983, av den amerikanske biokjemisten Mullis.

Testen hos en pasient med pulmonell tuberkulose utføres utelukkende i spesielle tilfeller når det er vanskelig å etablere diagnosen eller det er umulig å oppdage sykdommen på en instrumental måte.

Polymerasekjedereaksjon er en pålitelig PCR-metode. Denne analysen gjør det mulig å bestemme årsaksmidlet for hvor mye det er i blod, urin og væske i ryggmargen. En slik medisinsk undersøkelse er den sikreste.

PCR-analyse gir 100% resultater.

Den har en høy følsomhet, som bidrar til å gjenkjenne sykdommen for første gang timer etter infeksjon, før symptomer på sykdommen vises. Denne analysemetoden gir resultatet innen få timer etter levering av biologisk materiale. Såing av denne analysen utføres tre ganger, men aspirering av den syke magen utføres bare på sykehuset.

Tre kriterier ble utviklet for å bestemme resultatene: høy nøyaktighet, følsomhet opptil 90%, spesifisitet.

Testen for PCR brukes i noen tilfeller:

  1. å diagnostisere lunge tuberkulose;
  2. bestemme kilden til sykdommen;
  3. Definisjon av ekstrapulmonal lokalisering
  4. diagnose av gjentakelse.

Vurder resultatet, og foreskrive riktig medisinsk behandling, kan bare en spesialist. Det er svært viktig å tildele riktig medisinsk behandling for detektering av tuberkulose. Det er nødvendig å utføre en test for patogenes følsomhet overfor anti-tuberkuloseenheter.

En rekke tuberkulose medisinske tester

Du kan ta den nødvendige analysen på to måter: Ta blod eller spytt fra en person eller ta en sputum.

En blodprøve ved PCR kan være av to typer: ELISA og PCR. En slik studie bidrar til å overvåke effektiviteten av medisinsk behandling.

En ELISA bidrar til å finne antistoffer i menneskekroppen som motstår tuberkulose-mikrober. Denne studien utføres en gang om dagen. Den største ulempen er dens lave følsomhet, noe som gjør det mulig å bestemme bare en sykdom med lavt infeksjonsnivå.

Den mest populære og effektive forskningen er analysen av mycobacterium tuberculosis. Med henne kan legene enkelt finne DNA fra bakterier i humant blod. Denne metoden brukes også til å bestemme antall bakterier, for å kontrollere behandlingen av pasienten, for å oppdage tidlig gjentakelse.

PCR spytt er en av de mest moderne forskningsmetodene. En slik analyse vil bidra til å identifisere smittsomme bakterier i spytt. Ved å bruke PCR øker antall DNA-fragmenter av skadelige mikrober.

Kulturmetoden er beregnet for undersøkelse av humant sputum, for påvisning av mikrobakterier.

Forbereder for PCR-testing

Oppmerksomhet, du trenger riktig forberedelse av spytt for PCR. Hvis alle reseptene ikke følges, kan analysen være falsk positiv.

Før du tar testen, er det forbudt å røyke, ta mat og medisiner, samt konsumere alkohol i 12 timer. Det er forbudt å pusse tennene dine, du kan ikke bruke skylle, freshener for munn og tanntråd.

Det er forbudt å bruke leppestift og inngå intime forhold. Tillat å skylle munnen med vanlig kokt vann;

Denne undersøkelsen vil bidra til å identifisere: herpes, klamydia, tuberkulose, patogener av lungebetennelse, onkovirus, barolleose, mononukleose, HIV, hepatitt av alle slag, rubella.

Analysen av mykobakterier utføres hovedsakelig i kontroversielle tilfeller, nemlig hvis det er vanskelig å foreta en diagnose eller det var en kontakt med en pasient med tuberkulose, før operasjonen startet, for å oppdage sykdommen. Brukes til undersøkelse av en gravid kvinne, da denne metoden er den sikreste for mor og foster.

Noen ganger blir analysen utført i en privat klinikk, siden pasienten ikke overholdt reglene for testing, men samtidig er han bekymret for alle symptomene. Analysen kan utføres når spesialister ikke er sikre etter at man har utført en Mantoux-test eller pasienten er barn.

Fordeler og ulemper med medisinske tester for bestemmelse av tuberkulose

PCR er den mest populære og effektive måten å bestemme sykdommen på.

Den største forskjellen fra andre studier er et raskt og nøyaktig resultat.

Fordelen med denne medisinske undersøkelsen er at den kan utføres for urologisk, gynekologisk, onkologisk, smittsom, hematologisk, lunge, gastroenterologisk og andre studier.

Hovedfordelen ved en slik medisinsk studie er at en blodprøve, sputum og spytt er klar på kort tid (det vil ta 5 timer å oppdage sykdommen). En slik medisinsk undersøkelse tillater at tester utføres når visse metoder for å studere en sykdom er forbudt eller utilgjengelig. Flott for å oppdage tilbakefall hos mennesker.

Takket være denne analysen ble det mulig å gjennomføre forskning for ethvert biologisk miljø. Det er tillatt å ta med materiale fra barn. PCR gjør det mulig å identifisere årsaksmidlet i et hvilket som helst stadium av sykdommen. På grunn av sin høye følsomhet er det mulig å finne mikrober selv om bare noen få bakterier er til stede.

PCR-metoden utvider sine evner. Det brukes også til å bestemme faderskap, til fremstilling av nye gener, mutasjoner, for å krysse DNA-elementer, og så videre.

Ulempene med denne studien er en kostbar undersøkelsesmetode.

Etter medisinsk behandling kan en blodprøve vise tilstedeværelse av levende eller døde patogener i små mengder, etter en medisinsk undersøkelse vil det gi et positivt resultat.

Bakterier og mikrober kan gjennomgå mutasjoner, hvoretter PCR ikke kan identifisere og identifisere dem, slik at bare en spesialist kan foreskrive studiet av det nødvendige miljøet, ellers vil en slik undersøkelse være ineffektiv.

Etter testing er det et negativt resultat, men dette utelukker ikke muligheten for at en person blir smittet med tuberkulose. En slik medisinsk undersøkelse utføres for pasienter med alvorlig lungesykdom, når andre studier ikke gir nøyaktige resultater. PCR vil være nyttig for personer med pulmonal og ekstrapulmonell tuberkulose.

Dessverre er medisinsk utstyr for å oppdage tuberkulosepatogener veldig dyrt.

Offentlige sykehus og klinikker har ikke råd til det, men betalte klinikker tar pasienttester og gir klare resultater på kort tid.

Det er kontraindikasjoner til Mantoux testen? En PCR-analyse for tuberkulose vil gjøre.

Tuberkulose er en farlig sykdom som kan behandles med riktig diagnose.

En av de mest informative studiene for å identifisere sykdommen i et tidlig stadium kalles PCR (polymerasekjedereaksjonen) metoden.

PCR-analyse er ikke bare den mest informative, men også en av de mest tilgjengelige studier som kan oppdage tuberkulose i sine tidlige stadier.

Hva er PCR-analyse?

Alle levende mikroorganismer, inkludert virus og bakterier, inneholder RNA og DNA molekyler i deres struktur. Ved å markere disse syrene, er det mulig å si med stor sikkerhet hvilken utenlandsk agens som er tilstede i humant blod og å foreta en nøyaktig diagnose.

Essensen av PCR-metoden er den spesielle behandlingen av prøver av biologiske væsker, noe som resulterer i at det er mulig å bestemme hvilke arter mikroorganismer som er tilstede i den tilhører.

Analyse av PCR for tuberkulose: indikasjoner, fordeler og ulemper

PCR-teknikken brukes til personer med alvorlige lungesmerter i disse tilfellene og respiratoriske manifestasjoner (alvorlig hosting, hemoptyse), når det er umulig å nøyaktig diagnostisere sykdommen i henhold til kliniske symptomer.

Det anbefales å gjennomgå studien og etter direkte kontakt med bæreren av sykdommen. Fordelene han har inkluderer:

  • eksekveringshastighet - for å oppnå et resultat er det ikke nødvendig å dyrke en patogenkultur eller utføre andre komplekse prosedyrer;
  • svært informativ - når du diagnostiserer tuberkulose, når nøyaktigheten av analysen 90% og høyere;
  • høy følsomhet og spesifisitet - for å identifisere patogener i materialet kan bare inneholde en celle av viruset;
  • universalitet - praktisk talt alle biologiske væsker er egnet for analyse: sputum, blod, bronkialspyling.

Til sammenligning: nøyaktigheten av mikroskopi av sputum utstråler, som brukes til å oppdage tuberkulose, er bare 40-50%, og med et lavt antall patogener reduseres til 10% eller mindre. Sputumkulturen er mer informativ, men det tar 2 til 8 uker for å få resultater.

Du kan bruke PCR for tuberkulose i stedet for Mantoux, hvis personen har kontraindikasjoner til prøven.

Ulempene med teknikken inkluderer risikoen for å oppnå et falsk-negativt resultat. Med andre ord viser fraværet av spesifikt DNA i sputum, blod eller urin ennå ikke fraværet av tuberkulose hos en pasient.

Er viktig. I diagnosen tuberkulose hos barn er følsomheten av PCR-analysen lavere enn hos voksne, og er ca. 25-83%.

Bilde 1. Å gjøre PCR i stedet for Mantoux til et barn er et godt alternativ hvis han er allergisk eller ofte syk.

Prosedyren for analyse av PCR

Prosedyren for analyse av PCR utføres ved hjelp av en spesiell enhet som kalles forsterkeren, og består av fire trinn. For studien kreves DNA-seksjoner hvorfra syntesen av molekyler begynner, nukleotider (baser av DNA-molekyler), så vel som polymerase, eller et enzym som akselererer prosedyren.

  1. Biologisk materialeinnsamling (sputum, blod, bronkisk lavage).
  2. Oppvarmer prøven til en temperatur på ca. 98% for å ødelegge DNA-kjedenes primære struktur.
  3. Annealing, eller senking av temperaturen noen få grader for å binde primeren til DNA-strengen.
  4. Syntese av molekyler som trengs for å produsere et resultat.

Etter å ha utført 25-30 slike sykluser, dannes et visst antall kopier av DNA av virus, hvorfra det er lett å bestemme sykdomsfremkallingsmiddelet.

Oppmerksomhet: PCR-analysen skiller ikke mellom "døde" mikroorganismer og "levende", derfor kan resultatet være positivt i en viss tid etter behandlingen.

Forberedelse for analyse

Hvis en PCR-blodprøve tas for tuberkulose, er det ikke behov for spesialopplæring, men pasientene anbefales å følge generelle regler: Avstå fra å spise i minst 8 timer, utelukke alkohol og ta medisiner, røyk ikke i en time før du tar materialet.

Sputum samles om morgenen etter børsting og grundig skylling av munnen.

Hvis ekssudatet er dårlig utskilt, bør det tas en eksploderingsmiddel natten før eller inhaleres. Sputum med mucus, pus, hvite eller gulaktige flekker har diagnostisk verdi.

Hvis det ikke er mulig å ta sputum for analyse, brukes bronkokvabber til å identifisere patogener. En slik analyse krever ikke forberedelse, og materialet tas som følger. Ved hjelp av en laryngeal sprøyte, blir pasienten hellet i luftrøret en løsning av natriumklorid, noe som forårsaker en sterk hoste - hostende væske brukes til forskning.

Advarsel. Resultatet av analysen forvrenger antibiotika, heparin og andre legemidler som brukes til lokal behandling, så studien anbefales 10-14 dager etter administrering.