Urin og spyttprøver for tuberkulose

Mangfoldet av forskjellige tester for tuberkulose forklares ikke av den enkle diagnosen av denne sykdommen, men av sin listighet. Siden antikken har folk forsøkt å finne en måte å identifisere phthisis i de tidlige stadiene og gjennomførte derfor ulike studier av pasienter, hvorav noen egentlig vant seg som metoder for å diagnostisere en sykdom eller som måter å observere sykdomsprosessen på.

Hva er urin og spytt tester for?

En tank test for tuberkulose av spytt og urin utføres for å oppdage tilstedeværelsen av et patogen i kroppen. Samtidig er målet med disse studiene mer sannsynlig å bekrefte sykdommen med eksisterende symptomer, og ikke å finne det, siden det er mange andre mer pålitelige metoder for den første forebyggende diagnosen.

I tillegg kan leger utføre en urin- eller sputumprøve, samt analyse av spytt for tuberkulose for å identifisere overgangsprosessen til den lukkede formen av sykdommen til det åpne, som er preget av frigjøring av et stort antall baciller med naturlige væsker og pasientens avføring, og blir derfor svært epidemiologisk farlig for andre.

Urin test

Svaret på spørsmålet om hvordan man skal passere en urintest for tuberkulose er ganske enkelt. Urin for tuberkulose samles som en generell analyse av denne væsken, kjent for alle fra barndommen:

  1. Det er nødvendig om morgenen å samle den første delen av urinen, mens du bare samler midtdelen, og ikke den som går først eller sist.
  2. Før du samler inn, er det nødvendig å vaske både beholderen og urinorganene selv, slik at ingenting kan komme inn i krukken: protein, blod, bakterier osv.
  3. Den nødvendige mengden væske for studien på bare 50-100 ml, så du bør ikke ta med en halv liters boks urin.

OAM kan tas på en hvilken som helst klinikk, men tuberkulose baciller finnes kun i spesielle laboratorier som ikke er tilgjengelige i alle lokaliteter i Russland. De vanlige resultatene av denne undersøkelsen er som følger:

  1. Farge: gul, solgul eller halm.
  2. Transparens: høy.
  3. Lukt: uskarpt.
  4. PH-reaksjon: 4-7.
  5. Tetthet: 1012-1022 g / l.
  6. Protein: nei, men noen ganger opptil 0,033 g / l er akseptabelt.
  7. Glukose: opptil 0,8 mmol / l.
  8. Ketonlegemer: nei.
  9. Bilirubin: nei.
  10. Urobilinogen: 5-10 mg / l.
  11. Hemoglobin: nei.
  12. Erytrocytter: hos kvinner er maksimum tillatt verdi på opptil tre, og hos menn er opptil 1 i sikte.
  13. Leukocytter: Det tillatt antall organer i synsfeltet er opptil 6 hos kvinner og opptil tre hos menn.
  14. Epitelceller: opptil 10 stk. i sikte.
  15. Sylindere: ingen eller enkelt hyaline tilstede.
  16. Salt: nei.
  17. Bakterier: nei.
  18. Sopp: nei
  19. Parasitter: nei, men hvis det er, så er det ikke skummelt: bare i dette tilfellet utføres terapi med anthelmintiske stoffer.

OAM satser for tuberkulose forblir vanligvis det samme. Det eneste unntaket er akutte former for sykdommen, når urin endres på grunn av forstyrrelser i indre organer, samt kroniske lesjoner i lungene eller beinene, når det kan være tegn på amyloidose i analysen - et brudd på proteinmetabolisme, der resultatene av undersøkelsen vil inneholde protein.

Unntaket er tuberkulose av nyrene eller urinveiene - den vanligste ekstrapulmonale formen av sykdommen, forårsaket av overføring av infeksjon fra blodet, hvor urinalyse til tuberkulose varierer sterkt. I dette tilfellet observeres følgende fenomener:

  • skarp syre vedvarende reaksjon;
  • leukocyturi - leukocytter i urinen;
  • proteinuria - protein i urinen;
  • erytrocyturi - blod i urinen;
  • pyuria - pus i urinen.

Også i den akutte form av sykdommen eller under tuberkulose av nyrene og urinveiene i urinen, er det en aktiv form for patogenens baciller, som bestemmes av fargemetoden ifølge Zil-Nelson.

Spytt test

Faktisk produserer ikke BAC analyse av spytt for tuberkulose. Analysen av spytt er ofte uvitende folk kaller studiet av sputum for tuberkulose. I stedet for en sputumprøve kan analysen av spytt for tuberkulose utføres bare ved svært små nyfødte barn som ikke er i stand til å spytte ekspektorant fordi det automatisk svelger umiddelbart umiddelbart etter ekspektorering. Men i dette tilfellet tar legene bare en biopsi av vevet eller trekker lungesekretjonen ut med en sonde, og svermer ikke med spytt.

Sputumanalyse av patogenet utføres også ved bruk av Ziehl-Nelson-metoden. I tillegg til baciller kan enkelte tegn på lungepatologi vurderes med blotte øyne: fibrøse kaster, pus, blod, vevstykker og såkalte linser - store inneslutninger med en pinhead eller mindre rund form, der det vanligvis er et stort antall baciller.

Ziehl-Nelson-farvemetode

Ziel-Nelson-farvemetoden er basert på syrefastheten til Mycobacterium tuberculosis, som bare kan farves ved varmebehandling. I løpet av denne studien, skal kroppsvev, sputum, urin, blod eller noe annet stoff hvis analyse for tilstedeværelsen av MBT bli gjort, ligge i et gunstig miljø for å plante baciller til reproduksjon, hvis de er der selvfølgelig og deretter oppvarmes og farves. Deretter holdes alt i syre til misfarging og igjen malt uten oppvarming til en annen farge. Som et resultat er kontoret ganske enkelt å oppdage, siden de forblir farger av den første fargen og skiller seg godt ut mot den generelle bakgrunnen.

Phthisiology Notebook - Tuberkulose

Alt du vil vite om tuberkulose

Blod og urintester for tuberkulose

VA Koshechkin, Z.A. Ivanova

Elementer av rødt blod, som regel, forandrer seg lite med tuberkulose. Først etter akutt blodtap fra lungene eller tarmene kan man se anemi. En liten reduksjon i hemoglobin kan ses i kroniske former for fibro-cavernøs pulmonal tuberkulose.

En av indikatorene for aktiviteten til tuberkuløs prosess er ESR (erytrocytt sedimenteringshastighet). Accelerert ESR korrelerer ikke bare med aktiviteten og omfanget av den nåværende friske prosessen, men også med forverring av kroniske, spesielt fibro-cavernøse prosesser.

Elementer av leukocyttfraksjonen av blodet reagerer mer aktivt på tuberkuløs prosess.
Konvensjonelt er det tre faser av endringer i leukocytfraksjonen av blod forbundet med arten av lesjoner i lungetuberkulose.
1. Den nøytrofile fasen av kampen. I blodet øker andelen nøytrofiler, noe som resulterer i et skifte av formelen til venstre. Eosinofiler er fraværende, antall lymfocytter og monocytter reduseres.
2. Monocytfase - overvinne infeksjon. I blodet øker antall lymfocytter, blodformelen forskyves til venstre, antall nøytrofiler reduseres, det oppdages enkelt eosinofiler.
3. Faseutvinning. Andelen lymfocytter og eosinofiler økes. Blodtellingen normaliseres gradvis.
Denne separasjonen i faser reflekterer bare den totale blodreaksjonen.

Nukleær nøytrofileforskyvning i tuberkulose
I tillegg til kvantitative har gruppen av nøytrofiler en kvalitativ egenskap, som er mye tynnere og tidligere indikerer en rekke patologiske prosesser.

Voksen tuberkulose er vanligvis en sekundær prosess, oftest forårsaker det bare en økning i stabile nøytrofiler i blodet. Med utprøvde infiltrative-pneumoniske former og fenomener av lungvevsdeintegrering, vises forskyvningen av nøytrofiler til venstre ganske klart og kan nå opptil 20-30% av båndkjernen.

Lunginfiltratet oppløses ikke, og fokale former for tuberkulose i perioden med deres første deteksjon eller eksacerbasjon ved subfebril temperatur og lavverdige funksjonsforstyrrelser gir et mindre uttalt skifte. Imidlertid kan de resterende elementene i hemogrammet ikke oppdage abnormiteter i det hele tatt. Derfor blir en grundig definisjon av atomforskyvningen særlig viktig for tuberkulose.

Læren om atomforskyvning av nøytrofiler ble avansert av Arnet (1905) basert på en studie av blod i forskjellige infeksjoner, inkludert tuberkulose.

Ved å lage komplekse beregninger med mange skisser, oppdaget Arneth noe regelmessighet i konfigurasjonen av kjernene til nøytrofiler.

Blodet av en sunn person inneholder:

  • 5% nøytrofiler med ufortynnet innsnevring, ikke-segmentert kjernen (klasse I);
  • 35% nøytrofiler med to segmenter forbundet med trådlignende innsnevring (klasse II);
  • 41% av nøytrofiler med tre segmenter (klasse III);
  • 17% nøytrofiler med fire segmenter (klasse IV);
  • 2% nøytrofiler med fem segmenter (V klasse).

I tillegg til segmenteringen av kjernen, tok Arnet hensyn til dens form. Således for første klasse utpekte han flere underklasser i henhold til graden av depresjon av den ikke-segmenterte kjernen. De resterende klassene er delt inn i underklasser, avhengig av formen på segmentene.

I infeksjoner i forhold til alvorlighetsgraden deres, reduseres antall flersegmenterte former, antall lavsegmenterte (2-3 segmenter) og ikke-segmenterte (som er relativt unge celler) øker.

I Arneth-ordningen er antall ikke-segmenterte klasse I nøytrofiler vist til venstre; til høyre er antall klasse II-celler plassert, deretter klasse III osv. Følgelig øker antallet celler i venstre side av kretsen med en økning i ikke-segmenterte og lavsegmenterte former, og det er et "venstre skifte".

Urinanalyse
Urinutskillelse hos tuberkulosepasienter er nesten normal. Patologiske endringer i urinen kan være i nederlaget for tuberkulose i nyrene eller urinveiene.
Hos pasienter med kroniske former for lungetuberkulose kan tegn på amyloidose detekteres.

3.7 Blod og urinanalyse.

Elementer av rødt blod, som regel, forandrer seg lite med tuberkulose. Først etter akutt blodtap fra lungene eller tarmene kan man se anemi. En liten reduksjon i hemoglobin kan ses i kroniske former for fibro-cavernøs pulmonal tuberkulose. En av indikatorene for tuberkuløs aktivitet er ESR (erytrocytt sedimenteringshastighet). Accelerert ESR korrelerer ikke bare med aktiviteten og omfanget av den nåværende friske prosessen, men også med forverring av kroniske, spesielt fibro-cavernøse prosesser. Elementer av leukocyttfraksjonen av blodet reagerer mer aktivt på tuberkuløs prosess.

Konvensjonelt er det tre faser av endringer i leukocyttfraksjonen av blod som er forbundet med arten av lesjoner i pulmonell tuberkulose:

  1. Neutrofile - Kampens fase. I blodet øker andelen nøytrofiler, noe som resulterer i et skifte i blodformelen til venstre. Eosinofiler er fraværende, antall lymfocytter og monocytter reduseres. Lymfopeni er karakteristisk for progressive former for tuberkulose.
  2. Monocytfase - overvinne infeksjon. I blodet øker antall lymfocytter, blodformelen forskyves til venstre, antall nøytrofiler reduseres, det oppdages enkelt eosinofiler.
  3. Recovery fase Andelen lymfocytter og eosinofiler økes. Blodtellingen normaliseres gradvis.

En slik oppdeling i faser reflekterer bare generelle blodreaksjoner, som ikke reflekterer hele kompleksiteten av blodreaksjoner mot kronisk tuberkuloseinfeksjon.

Nukleær nøytrofileforskyvning i tuberkulose.
I tillegg til kvantitative har gruppen av nøytrofiler en kvalitativ egenskap, som er mye tynnere og tidligere indikerer en rekke patologiske prosesser. Voksen tuberkulose, vanligvis post-primær prosessen, forårsaker ofte bare en økning i stabile nøytrofiler i blodet. Med utprøvde infiltrative pneumoniske former og med fenomenene lungvevsdeintegrasjon, vises forskyvningen av nøytrofiler til venstre ganske klart og kan nå opp til 20-30% av staben.

Lung infiltrere uten oppløsning og fokale former for tuberkulose i perioden med deres første deteksjon eller eksacerbasjon ved subfebril temperatur og lavgradige funksjonsforstyrrelser gir et mindre uttalt skifte. Samtidig kan de resterende elementene i hemogrammet være helt uten avvik. Derfor blir en grundig definisjon av et atomforskyvning diagnostisk verdi i tuberkulose.
Studien av neutrofile kjernefysiske skift ble avansert av Arneth (Arneth) basert på en studie av blod i forskjellige infeksjoner og spesielt i tuberkulose. Ved å lage komplekse beregninger med mange skisser, oppdaget Arneth noe regelmessighet i konfigurasjonen av kjernene til nøytrofiler. I blodet av en sunn person er nøytrofiler med ufortynnede bannere, nonsegmenterte kjerner (klasse I) 5%; neutrofiler med to segmenter forbundet med filiform innsnevring (klasse II) - 35%, klasse III - 41%, klasse IV - 17% og klasse V - 2%. I infeksjoner i forhold til alvorlighetsgraden minker antallet mange segmenterte former, antall små segmenterte (2-3 segmenter) og usegmenterte vokser. I Arneth-ordningen er antall usegmenterte nøytrofiler skrevet til venstre; til høyre er antall celler i klasse II, deretter klasse III osv. Følgelig øker antallet celler i venstre side av kretsen med en økning i ikke-segmenterte og mindre segmenterte former, og et "venstre skifte" oppstår.

Tegn på tuberkuløs prosess, i tillegg til endringer i hemogrammet, er hyponatremi. Det er det mest karakteristiske metabolske skiftet. Årsaken til hyponatremi er utviklingen av et antidiuretisk hormonsubstans påvirket av pulmonell tuberkulose. Spesielt intensivt er dette stoffet produsert i perioden med vanlige fall-destruktive former.

Urinanalyse
Urinutskillelse hos tuberkulosepasienter er nesten normal. Patologiske endringer i urinen kan være i nederlaget for tuberkulose i nyrene eller urinveiene. Proteiner, leukocytter, MBT oppdages i urinen. Hos pasienter med kronisk tuberkulose i lungene eller beinene, kan tegn på amyloidose detekteres (resistent pururia, brutto hematuri).

Diagnose av tuberkulose ved analyse av blod og urin

Elementer av rødt blod, som regel, forandrer seg lite med tuberkulose. Først etter akutt blodtap fra lungene eller tarmene kan man se anemi. En liten reduksjon i hemoglobin kan ses i kroniske former for fibroa, cavernøs lungt tuberkulose.

En av indikatorene for aktiviteten til tuberkuløs prosess er ESR (erytrocytt sedimenteringshastighet). Accelerert ESR korrelerer ikke bare med aktiviteten og omfanget av den nåværende friske prosessen, men også med forverring av kroniske, spesielt fibrokavernøse prosesser.

Elementer av leukocyttfraksjonen av blodet reagerer mer aktivt på tuberkuløs prosess.

Konvensjonelt er det tre faser av endringer i leukocytfraksjonen av blod forbundet med arten av lesjoner i lungetuberkulose.

  1. Neutrofile fase av kamp. I blodet øker andelen nøytrofiler, noe som resulterer i et skifte av formelen til venstre. Eosinofiler er fraværende, antall lymfocytter og monocytter reduseres.
  2. Monocytfase - overvinne infeksjon. I blodet øker antall lymfocytter, blodformelen forskyves til venstre, antall nøytrofiler reduseres, det oppdages enkelt eosinofiler.
  3. Recovery fase Andelen lymfocytter og eosinofiler økes. Blodtellingen normaliseres gradvis.

Denne separasjonen i faser reflekterer bare den totale blodreaksjonen.

Nukleær nøytrofileforskyvning i tuberkulose

I tillegg til kvantitative har en gruppe nøytrofiler en kvalitativ egenskap, som er mye tynnere og tidligere indikerer ulike patologiske prosesser.

Voksen tuberkulose er vanligvis en sekundær prosess, oftest forårsaker det bare en økning i stabile nøytrofiler i blodet. Med utprøvde infiltrative-pneumoniske former og fenomener av lungvevsdeintegrering, vises forskyvningen av nøytrofiler til venstre ganske klart og kan nå opptil 20-30% av båndkjernen.

Lunginfiltratet oppløses ikke, og fokale former for tuberkulose i perioden med deres første deteksjon eller eksacerbasjon ved subfebril temperatur og lavverdige funksjonsforstyrrelser gir et mindre uttalt skifte. Imidlertid kan de resterende elementene i hemogrammet ikke oppdage abnormiteter i det hele tatt. Derfor blir en grundig definisjon av atomforskyvningen særlig viktig for tuberkulose.

Læren om atomforskyvning av nøytrofiler ble avansert av Arnet (1905) basert på en studie av blod i forskjellige infeksjoner, inkludert tuberkulose.

Ved å lage komplekse beregninger med mange skisser, oppdaget Arneth noe regelmessighet i konfigurasjonen av kjernene til nøytrofiler. Blodet av en sunn person inneholder:

  • 5% nøytrofiler med ufortynnede wafers, ikke-segmenterte kjerner (klasse I);
  • 35% nøytrofiler med to segmenter forbundet med trådlignende innsnevring (klasse II);
  • 41% av nøytrofiler med tre segmenter (klasse III);
  • 17% nøytrofiler med fire segmenter (klasse IV);
  • 2% nøytrofiler med fem segmenter (V klasse).

I tillegg til segmenteringen av kjernen, tok Arnet hensyn til dens form. Således forklarte han flere underklasser i henhold til graden av depresjon av den ikke-segmenterte kjernen. De resterende klassene er delt inn i underklasser, avhengig av formen på segmentene.

I infeksjoner, i forhold til alvorlighetsgraden, reduseres antallet av flersegmenterte former, antall lavsegmenterte (2-3 segmenter) og ikke-segmenterte (relativt små celler) øker. I Arneth-ordningen er antall ikke-segmenterte klasse I nøytrofiler vist til venstre; til høyre er antall klasse II-celler plassert, deretter klasse III osv. Følgelig øker antallet celler i venstre side av kretsen med en økning i ikke-segmenterte og lavsegmenterte former, og det er et "venstre skifte".

Urinanalyse

Urinutskillelse hos tuberkulosepasienter er nesten normal. Patologiske endringer i urinen kan være i nederlaget for tuberkulose i nyrene eller urinveiene.

Hos pasienter med kroniske former for lungetuberkulose kan tegn på amyloidose detekteres.

35. Diagnostisk verdi av blod og urintester hos pasienter med tuberkulose.

Blodtest Hemoglobin og røde blodlegemer forblir i de fleste tilfeller uendret, med unntak av tilfeller ledsaget av akutt blodtap. En indikator som indikerer tilstedeværelsen av en aktiv tuberkuløs prosess, er erytrocytt sedimenteringshastigheten. Accelerert ESR er karakteristisk ikke bare for fersk aktiv tuberkulose, men også for forverring av kronisk prosess. De resterende indikatorene for blodprøven varierer sterkt avhengig av arten av lungeskaden. Endringer i indikatorer blod når tuberk. Uten spesifisitet, hjelper hemogram diagnosen. tuberk fase. behandle og vurdere byrden. hans flyt. Personer undersøkt for tuberkulose og pasienter med tuberkulose. tilordnet den felles kile. blodprøve med definisjon av ESR, innhold eritr. og leukots., konsentrasjon av hemoglob og beregning av leukocytformel. Pasienter med tuberkulose i nærvær av pyemi anbefales. bestem antall retikulocytter for å vurdere regenerering. Beinmargens evner, i differensialdiagnostiske tilfeller - trombocyttall. Hematologen endrer seg. indikatorer avhenger dels av lokalisering, natur og alvorlighetsgrad av inf. prosess, på den annen side - fra kroppens tilstand, dens kompenserende reserver. Hemogram har. heller en fase av prosessen enn kilen. forme. For eksempel, hos pasienter med vanlige destruktive former for tuberkulose med kompensasjonsprosess og fravær av frisk betennelse. Endringer i blodbildet kan være normale. Slipende rør. Prosessen er vanligvis ledsaget av et neutrofilt stabskift, lymfopeni og en økning i ESR. Tot. innholdet av leukocytter na. de fleste pasienter i normal rekkevidde. Bare det akutte og alvorlige kurset er preget av en økning i innholdet av leukocytter i blodet til 15 x 109 / l. Det neutrofile skiftet av leukocyttformelen til venstre samtidig blir mer signifikant. I alvorlige tilfeller av sykdommen (særlig i miliær tuberkulose), kan en leukemoidreaksjon av myeloid typen forekomme. Lettet av den akutte prosessen medfører normalisering av disse forandringene, utseendet av lymfocytose. Neutropeni og lymfocytose kan observeres ved kronisk hematogen spredning og fokal tuberkulose.

Urinanalyse I analysen av urin hos en pasient med pulmonell tuberkulose er det ingen merkbare avvik fra normen. Endringer vises bare i tuberkuløse lesjoner av nyrene og urinveiene. Rutinemessig urinalyse for tuberkulose er ikke bare nødvendig dersom nyreskader mistenkes. I det siste tilfelle han er en. for tidlig diagnose. Den vedvarende tilstedeværelsen av pus i urinen, og aller viktigst, tuba. bakterier, selvfølgelig, peker på karet. nyrene. Imidlertid er det noen ganger nødvendig å gjenta. Issled. urin for å oppdage patologen. funn; så med noen. former for tuberkulose månedlig urintest (formidlet, komplisert primærkompleks). Små endringer i urinen i form av spor av protein, enkelt. leukocytter og friske erytrocyter kan periodisk oppdages som fenomen av generell forgiftning. Endelig gir noen reaksjoner med urin indikasjoner på alvorlighetsgraden av prosessen. Blant dem er utseendet av diazo-reaksjon under generalisering. former for tuberkulose, spesielt med miliær tuberkulose.

Utvilsomt har prognostisk verdi i løpet av tuberkulose urokromogen løsning. Det er veldig enkelt, og dette er en stor fordel. Hun er produsert. mark. måte: ta filtrert urin og fortynn det 10 ganger. Hell i to rør, en betjening som en kontroll, og en løsning av kaliumpermanganat 1: 1000 tilsettes til den andre. En positiv reaksjon i røret resulterer i en skarp kanariefarging, noe som er svært tydelig sett i forhold til kontrollen. Det er bare å ta hensyn til kun godt uttrykt. farge. Reaksjonsmekanismen er at kaliumpermanganat oksiderer fargeløst urokromogen i urinen, noe som er signifikant forhøyet ved progressiv tuberkulose.

Hva er testene for pulmonell tuberkulose?

Laboratorietester passerer alle pasientene. Siden patologi er smittsom mot andre, bidrar rettidig studier av biologisk materiale til nøyaktighet i diagnosen og bidrar til å kontrollere behandlingsforløpet.

Liste over laboratorietester for pulmonell tuberkulose

Liste over tester for tuberkulose

Listen over obligatoriske tester for pulmonell tuberkulose er som følger:

  • sputum undersøkelse - i nærvær av hulrom, finnes rislegemer, protein, elastiske fibre, kalsiumsalter i det;
  • ekssudatanalyse - viser nøytrofiler og endotelceller med overlegenhet av leukocytter;
  • analyse av bronkoalveolær lavage viser et redusert antall alveolære makrofager med en kraftig økning i nøytrofiler med et aktivt forløb av tuberkuloseprosessen, og med et inaktivt kurs av indikatorer for makrofager økte noe;
  • serologiske analyser eller enzymimmunoassays, testes for bestemmelse av serumimmunoglobuliner for mykobakterielle antigener. Forholdet mellom det diagnostiske antistoff-titer og det forårsaker sykdomsfremkallende middel overstiger verdien 1: 8.

Hva viser blodprøveresultater?

På grunn av den biokjemiske analysen av blod i lungetuberkulose har spesialister muligheten til å bestemme retningen for endringer i protein og dets fraksjoner i blodserum. Dette bestemmer form og stadium av sykdommen. Uronsyre, kobber, kolesterol og lysozymnivå overskrides. Kreatinekinase og angiotensinkonverterende enzymaktivitet observeres. Respiratorisk acidose utvikles på grunn av en reduksjon i pH og en økning i pCO2.

Når det gjelder hemoglobin, er reduksjonen, som fører til utvikling av anemi, ikke typisk for tuberkuloseprosessen.

Urinalyse hos tuberkulose pasienter

Gjør urinprøver for pulmonell tuberkulose?

Urinutskillelse hos tuberkuløse pasienter forblir normal. Patologiske endringer skjer vanligvis dersom nyrene og urinveiene er involvert i tuberkuløs prosess. Hos pasienter med kronisk sykdomsform kan det oppdages tegn på amyloidose i løpet av studien.

Hva betyr analysen av urin for lungetuberkulose, hvilken informasjon kan indikere utviklingen i kroppen av den patologiske prosessen?

  1. Tettheten er 1,015 - 1,025.
  2. Enkel forekomst av erytrocytter er tillatt, hos barn - ikke mer enn 5.
  3. Hvite blodlegemer bør ikke være mer enn 2 enheter, for kvinner og jenter - opptil 5 enheter.
  4. Saltverdier bør ikke være signifikante.
  5. Den tillatte verdien av flat epitel er opptil 5 enheter.

Hva vil blodprøven for lungetuberkulose

Tuberkulose er en farlig og vanskelig sykdom å behandle. Effektiviteten av behandlingen avhenger av hvor raskt det ble oppdaget. Ingen er forsikret mot infeksjon, absolutt alle kan bli syke - voksne, barn, eldre.

I mangel av nødvendig rettidig behandling blir den lukkede form til en farlig åpen en, derfor er diagnose i de tidlige stadiene av sykdommen ekstremt viktig, og dette kan oppnås ved regelmessige og omfattende undersøkelser.

I denne artikkelen vil vi se på ulike metoder for å diagnostisere denne lungesykdommen, og også prøve å avgjøre hvilken blodprøve for pulmonell tuberkulose som er mest pålitelig og informativ.

Når det blir nødvendig å sjekke om tuberkulose

Så, eksamen er nødvendig for:

  • kontakt med bærere av sykdommen;
  • generell svakhet;
  • vekttap;
  • temperaturøkning om kvelden;
  • kronisk hoste.

Det er spesielt viktig å bestemme tilstedeværelsen av tuberkulose i barndommen i tid, da det er svært sannsynlig hos barn at infeksjonen vil forårsake ytterligere patologiske prosesser i kroppen.

Det er viktig! En av de forebyggende tiltakene er en BCG-vaksinasjon på den fjerde dagen i et barns liv og i 7 år. Barnets kropp er svakere enn en voksen, så det er viktig å beskytte den mot smitte og legge ned vaksinasjoner.

Forskning for mistanke om tuberkulose

Tuberkulose kan påvises på flere måter.


Foto 1. Fragment av røntgen på brystet til en pasient med tuberkulose. Fluorografi er en av de mest pålitelige metodene for å diagnostisere denne sykdommen, men er mest effektiv i kombinasjon med andre. For eksempel vil en detaljert blodprøve vise tuberkulose selv tidlig.

  1. Røntgenundersøkelse. Fluorografi vil bidra til å evaluere graden av lungeskader. Imidlertid bør det tas i betraktning at røntgenbildet ikke vil vise de første stadiene av sykdommen. Undersøkelsen bør være omfattende. For en mer komplett undersøkelse skal pasientens lunger fotograferes både fra forsiden og fra baksiden.
  2. Tuberkulinprøve. Når du undersøker barn, brukes tuberkulinprøven oftest (Mantoux test). Tuberkulin er en blanding av proteiner isolert fra døde patogener. Innføringen av stoffet under huden forårsaker en reaksjon av immunitet, som manifesterer seg på forskjellige måter. Hvis det ikke er noen patogener i kroppen, så vil injeksjonen etter et par dager etterlate et merkbart merkbart merke. Med betennelse i injeksjonsstedet eller dannelsen av en abscess er sannsynligheten for infeksjon hos pasienten høy.

Det er viktig! Mantoux-testen tillater ikke å bestemme forekomsten av tuberkulose med en 100% sannsynlighet, men det vil bidra til å bestemme risikogruppen for sykdommen. Med forsiktighetsprøver bør det gjøres til de som lider av allergi. Kroppen kan reagere på innføringen av sammensetningen på en uforutsigbar måte.

  1. Blodprøve Resultatene bidrar til å oppdage spor av patogenet. Utnevnt til å identifisere den endelige diagnosen og omfanget av sykdommen.
  2. Sammensetning av munnen. Tilstedeværelsen av mycobacterium tuberculosis gjør det mulig å identifisere og studere sputum. Materialet er funnet å overskride normen for proteinindikatorer, som skiller den fra bronkialsputum, så vel som smittsomme stoffer.

Er det mulig å bestemme tuberkulose ved en generell blodprøve?

Sammensetningen av røde blodceller (røde blodlegemer) i nærvær av bakterier varierer litt. Akutte tarm- eller lungeblødninger fremkaller anemi, en signifikant reduksjon i hemoglobin.

Det er folk som tviler på om det er mulig å bestemme tuberkulose ved en blodprøve. Faktisk er en generell analyse i stand til å identifisere utvikling av inflammatoriske og patologiske prosesser i kroppen ifølge en økt indikator for ESR. Den økte frekvensen indikerer ikke bare aktiviteten og varigheten av den aktuelle betennelsen, men også forverringen av kronisk, spesielt i de siste stadier av sykdommen.


Foto 2. Legen utfører prosedyren for å samle blod fra pasientens blodår med en sprøyte. Etter det vil en blodprøve bli utført, med tuberkulose, indikatorer av hvilke vil indikere inflammatoriske prosesser.

Det er viktig! ESR-nivåer kan forveksles med indikatorer for betennelse eller lungekreft. I dette tilfellet er det nødvendig å undersøke antall eosinofiler (en av typer hvite blodlegemer). Hvis eosinofiler forstørres, og leukocytformelen viser dramatiske endringer i blodprøven, skjer dette med tuberkulose, og er utelukket med lungebetennelse.

Er kliniske og biokjemiske blodprøver nøyaktige?

En blodprøve for lungetuberkulose er ofte utilstrekkelig til å diagnostisere en tuberkelbacillus. Deretter er ytterligere omfattende undersøkelse nødvendig. Det samme kan sies om biokjemisk analyse av blod. I tilfelle av en første fase av tuberkulose eller latent form, vil det sannsynligvis ikke vise noen unormaliteter. Og bare i akutte former av sykdommen vil albumin-globulinkoeffisienten i den bli senket.

Typer blodprøver for antistoffer mot tuberkulose

Det er mer nøyaktig, dybdegående enn OAK, metoder for blodprøving, som gjør det mulig å oppdage tuberkulose. Hvordan bestemme fra slike blodprøver, hvis du har en sykdom, bør du vurdere neste.

Etablering av en objektiv diagnose er mulig ved å bruke tilnærmingene til polymerasekjedereaksjonen (PCR) og enzymbundet immunosorbentanalyse (ELISA).

Viser ELISA-metoden tilstedeværelsen av tuberkulose

Ved hjelp av ELISA påvises tilstedeværelsen av patogene antistoffer i pasienten. Metoden er praktisk fordi den lar deg samtidig undersøke et stort antall prøver. Den har imidlertid lav følsomhet og anbefales til bruk i områder med lav forekomst.

Hvilke endringer avslører PCR-metoden?

PCR-metoden er blant de mest effektive. Det brukes til å identifisere sykdommen, bestemme alvorlighetsgraden og remisjonen under behandling ved å finne DNA fra mikrobakterier.

PCR brukes til å:

  • deteksjon av Kochs progressive wand;
  • test for påvisning av ekstrapulmonal tuberkulose;
  • rask etablering av foci for lokalisering av infeksjon;
  • diagnose av sykdom tilbakefall;
  • overvåking av behandlingsforløpet.

Både han og andre blodprøver for antistoffer mot tuberkulose anses å være ganske pålitelige. Men det er andre.

Alternative blodprøvemetoder

Interferon Gamma Release Assays er mindre vanlig enn PCR og ELISA for å detektere patogene mikrobakterier. Det kan utføres i stedet for tuberkulinprøve. Reaksjonen indikerer dannelsen av gamma interferon som respons på introduksjonen av mikrobakterier. Resultatene kan nøyaktig bestemme tilstedeværelsen av infeksjon.

En annen alternativ forskningsmetode er QuantiFERON-TB Gold. Denne metoden brukes oftest til å teste barn som har en sterk allergisk reaksjon på tuberkulinprøven.

Det er viktig! Begge metodene tillater ikke å bestemme infeksjonsgraden - aktiv eller latent.

Den behandlende legen bestemmer hvilken type blodprøve som skal brukes. Ofte utføres studien i et kompleks. En blodprøve for latent tuberkulose kan ikke gi resultater i det hele tatt.

Hvordan er indikatorene for blodprøver

Ved tolkning av en generell blodprøve bør det tas hensyn til nivået av ESR, hemoglobin, leukocytter.

Nivået på ESR hos en sunn person vil være mindre enn 50 enheter, overskudd av denne indikatoren indikerer den inflammatoriske prosessen i kroppen.

Antall leukocytter i blodet hos en pasient med tuberkulose når 6 til 10 9 / l, i akutte og alvorlige tilfeller av sykdomsutviklingen - 12-15 til 10 9 / l.

Sammensetningen av røde blodlegemer hos de fleste pasienter forblir normalt. Lavt hemoglobin registreres i miliær tuberkulose, kaseøs lungebetennelse.

Akutte, progressive og kompliserte sykdomsformer endrer leukogrammet. I noen tilfeller oppdages moderat leukocytose (opptil 10.000-15.000 leukocytter), mindre vanlig leukopeni.

Uansett hva du gjør en blodprøve for pulmonell tuberkulose, dechifterer dem er arbeidet med erfarne fagfolk. Bare de kan nøyaktig avgjøre hvordan tuberkulose kjører, hvis det fortsatt oppdages. Analyser av ELISA og PCR dekodes det samme. På spesielle skjemaer er et negativt eller positivt resultat angitt motsatt angitt infeksjon.

Typer av tester for behandling

Behandlingsproblemet ligger i det faktum at infeksjonen kan bli resistent mot noen form for antibiotika, særlig i avanserte stadier, samt en lang inkubasjonsperiode der det ikke er mulig å bestemme infeksjonen.

Etter å ha identifisert og forskrevet den aktuelle behandlingen, blir helingsprosessen overvåket i intervaller på 1-2 ganger per måned. Pasienten gir blod og slim.


Foto 3. Medisinsk bord på legekontoret etter pasientens sputum er samlet. Sputumprøver er omsluttet i plastrør og venter på laboratorietesting.

Du kan ta en fullstendig blodtall, en Mantoux-test, og du kan gjennomgå fluorografi på nesten ethvert medisinsk senter, dette gjøres umiddelbart hvis det oppstår mistanke. Basert på dataene som er innhentet, vil terapeuten få en konklusjon om fraværet av patologiske forandringer i kroppen eller vil utstede en henvisning til videre undersøkelse i en tubdispanser.

Spesialiserte og mer nøyaktige studier gjennomføres i TB-dispensarene, som er utstyrt med laboratorier og nødvendige reagenser for forskning.

Så, oppsummering av det ovennevnte:

  • tuberkulose er en farlig sykdom som er ekstremt viktig å oppdage i tide;
  • økt ESR, mørkere i lungene, endringer i leukogram gir grunnlag for å sende pasienten til videre undersøkelse for påvisning av infeksjon;
  • behandling utføres ved hjelp av anti-TB medisiner; Den intensive behandlingsfasen fortsetter til positive kliniske og radiologiske indikatorer er oppnådd.

Nyttig video

Vi tilbyr å se på en video, som også svarer på spørsmålet om det er mulig å oppdage tuberkulose ved en blodprøve. Den beskriver nærmere om QuantiFERON TB Gold quantiferon test, som viser i analysen av blod tuberkulose av immunresponsen.

Dekryptere en fullstendig blodtelling for tuberkulose hos voksne og barn

Infeksjon med tuberkelbacillus er ikke lenger en setning for en person. Moderne medisin bruker effektive verktøy for å bekjempe denne sykdommen, hvis den oppdages på et tidlig stadium. Regelmessige forebyggende undersøkelser og tester, inkludert en generell blodprøve for tuberkulose, bidrar til å oppdage patologi i tide.

Endringer i det kliniske bildet

Fullstendig blodtelling for lungetuberkulose (UAC) har ingen spesifikke manifestasjoner. Det er ingen markører som snakker om utviklingen av tuberkulose og bestemmer scenen av sykdommen. Men ved ikke-spesifikke tegn kan man dømme om latent inflammatorisk prosess og mistenker endringer i lungene.

Avvik av røde blodlegemer fra normen

Med en treg form eller lokalisert lesjon, endrer antall erytrocytter i blodet ikke, men fargen endres. Hemoglobinnivået i erytrocyten er redusert. Denne tilstanden kalles hypokromi.

Med signifikante infiltrative lesjoner i lungevevvet, viser en klinisk blodprøve en reduksjon av antall røde blodlegemer, en reduksjon av deres størrelse. Ufødte celler vises - retikulocytter, som er "forløperne" av røde blodlegemer. I begynnelsen av tuberkulose overstiger antall retikulocytter ikke over 0,5%.

Alvorlig anemi er vanlig hos voksne med avansert tuberkulose. Samtidig øker antall retikulocytter til 1% av det totale antall røde blodceller.

Leukocyt Skift

Leukocytter som celler i immunsystemet blir brukt som svar på sykdommen i utgangspunktet. Ifølge en generell blodprøve og en leukogramstudie er både tilstedeværelsen av den inflammatoriske prosessen og dens stadium bestemt.

I den ukompliserte lukkede formen er det en signifikant økning i antall neutrofiler - hvite blodlegemer som er ansvarlige for kampen mot bakteriell infeksjon. Promyelocytter vises - umodne leukocyttceller, som vanligvis ikke forekommer.

Lang, hardflytende, pulmonell tuberkulose ledsages av degenerative endringer i nøytrofiler, dannelsen av patologisk granularitet. Antallet eosinofiler synker kraftig. Det er lymfopeni - en reduksjon i antall lymfocytter. Alle disse tegnene indikerer en langvarig inflammatorisk prosess, ledsaget av dannelse av pus og nekrotiske masser.

ESR endring

Bestemmelse av tuberkulose i sin aktive fase hjelper ESR - en indikator for erytrocytt sedimenteringshastighet. Akkumuleringen av immunglobuliner, fibrinogen, bidrar til utfelling av røde blodlegemer og deres hurtige nedbør. Normalt er disse blodparametrene hos menn ikke høyere enn 10 mm / t, hos kvinner - 15 mm / t. Accelerasjon av ESR opptil 80 mm / t indikerer aktivering av inflammatorisk prosess i kroppen.

Funksjonsindikatorer hos barn

En blodprøve for tuberkulose hos et barn er ikke mye forskjellig fra endringer i en voksen. Dekoding av resultatet utføres på de samme indikatorene:

  • I den første fasen av sykdommen endres erytrocytformelen litt. Anemi kan bare forekomme i en destruktiv form. I andre tilfeller forblir antallet røde blodlegemer uendret, mens andelen av umodne erytrocytter øker. Tuberkulose hos barn kan mistenkes når retikulocytter oppdages over 1 ppm.
  • Leukocytindikatorer gjennomgår også endringer. Leukocytose utvikler seg - en økning i antall hvite blodlegemer som skyldes nøytrofiler, og antallet lymfocytter reduseres kraftig. Ved normen for barn over 6 år 40%, er antallet lymfocytter i tuberkulose ikke mer enn 20%.

I de tidlige stadiene av sykdommen vokser antall eosinofiler - celler som reagerer på en allergisk reaksjon. En kraftig nedgang i dem viser at prosessen går inn i den aktive fasen.

  • Hos barn er ESR ikke større enn 10mm / t. Accelerasjon til 50 mm / t indikerer mobilisering av kroppens forsvar for å bekjempe den inflammatoriske prosessen.

I et barn forekommer den første fasen av sykdommen ofte uten åpenbare symptomer eller er maskert av ARVI.

Endringer avhengig av sykdomsstadiet

Er det mulig å på en pålitelig måte opprette et tuberkuløst fokus ved hjelp av laboratorieblodprøver? Dessverre ikke. Fullstendig blodtelling for tuberkulose er i stand til å oppdage den inflammatoriske prosessen bare i bestemte stadier av sykdommen.

  1. I infiltrasjonstrinnet reagerer leukocytter litt, og økningen øker.
  2. I oppløsningsstadiet oppstår uttalt endringer i leukocytformel og erytrocytter.
  3. Den formidlede form under analysen vil gi mer uttalt ovennevnte avvik.
  4. Når den inflammatoriske prosessen avtar eller gjenopprettingsprosessen, returnerer det røde blodet til normalt, gjenopprettes antallet og forholdet mellom leukocytter.
  5. En inaktiv form for pulmonell tuberkulose blir ikke påvist ved generell blodprøve.

Tidlig påvisning av tuberkulose er en forutsetning for vellykket behandling, og et komplett blodtall er en metode som gjør det mulig å oppdage latent inflammatorisk prosess i tide. Og selv om analysen ikke regnes som en spesialisert forskningsmetode, er det mulig å dekke en stor masse mennesker på kort tid. Ved påvisning av abnormiteter i det karakteristiske kliniske bildet, er en spesifikk analyse av tuberkulose og fluorografi foreskrevet.

Hvem sa at det er umulig å kurere tuberkulose?

Du har blitt diagnostisert med tuberkulose. Du oppfyller alle legenes forskrifter, men det er ingen gjenoppretting. En håndfull piller skader magen, forfølger svakhet og apati? Kanskje du bør endre tilnærmingen til behandlingen.

Leger kan ikke overvinne årsaken til sykdommen din. Les historien om Helen, som klarte å beseire tuberkulose uansett hva. Les artikkelen >>

Indikatorer for ESR i tuberkulose

For tiden, ifølge statistikk, er tuberkulose den vanligste sykdommen blant mennesker. Ofte påvirker denne sykdommen barn og de fattige. Det er verdt å merke seg at hvert år dobler andelen syke mennesker. I denne forbindelse utvikles nye stoffer og metoder for behandling av tuberkulose.

Hovedfaktoren som bidrar til utviklingen av tuberkulose er en reduksjon i immuniteten, som kan skyldes miljøforurensning. Det er mulig å diagnostisere denne sykdommen ved hjelp av tester og på mange andre måter.

En blodprøve for tuberkulose er hovedindikatoren for å bestemme sykdommen hos mennesker. Tuberkulose er en farlig smittsom sykdom. Det er verdt å merke seg at i det mer avanserte stadium av sykdommen er svært vanskelig å behandle, så det er svært viktig å legge merke til sykdommen i tide og begynne å behandle på sykehuset på riktig måte.

Måter å opprettholde tuberkulose

Sykdommen har en luftbåren overføringsmekanisme. Dermed kan infeksjon oppstå som et resultat av inngangen av patogenet inn i kroppen gjennom slimhinnen. I tillegg kan tuberkulose overføres fra en syke mor til et utviklende foster.

I nesten alle tilfeller påvirker tuberkulose luftveiene. Separat den ekstrapulmonale formen av sykdommen (påvirker fordøyelsessystemet, sentralnervesystemet, forstyrrer synsfunksjon, ledd, urogenitalt system).

Den viktigste kilden til sykdommen er mycobacterium - Koch's wand. Det påvirker lungene, huden, beinene og mange andre organer. Vanligvis kan tuberkulose føre til uførhet eller til og med død. Men hvis sykdommen diagnostiseres så tidlig som mulig, så er det ganske godt behandles.

Indikatorer for ESR i tuberkulose

En blodprøve for bestemmelse av tuberkulose viser det kliniske løpet av den inflammatoriske prosessen. Normalt er erytrocytt sedimenteringshastigheten: hos menn, 1-10 mm / t, hos kvinner, 2-15 mm / t.

Patogenet, som kommer inn i menneskekroppen, forårsaker skade på vev og organer i forskjellige systemer. Inkludert endringer i blodtall. Så når det er smittet med en pinne, er det en svært sterk økning i erytrocytt sedimenteringshastigheten. Antall leukocytter øker også, siden kroppen har en inflammatorisk prosess.
Tuberkulose forårsaker som regel ikke betydelige endringer i røde blodlegemer. Utviklingen av en liten anemi og lavt hemoglobin kan utvikles bare med signifikant blodtap. Dermed er tuberkulose ledsaget av et overskudd av ESR betydelig høyere enn normalverdien.

symptomer

De viktigste symptomene på tuberkulose inkluderer:

  1. Økt kroppstemperatur;
  2. Nattvette;
  3. Utseendet til kortpustethet;
  4. Tørr, sterk hoste med sputum (blodstriper kan være tilstede);
  5. Generell tretthet;
  6. Dramatisk vekttap
  7. Rask tretthet;
  8. apati;
  9. aggressivitet;
  10. Mangel på appetitt;
  11. Brystsmerter.

Barn, i motsetning til voksne, er mest utsatt for tuberkulose. Derfor er det nødvendig å regelmessig undersøke barnet ditt og gjennomføre en test for å identifisere Kochs pinner. Tidlig diagnose gir deg mulighet til å oppnå et positivt resultat uten alvorlige konsekvenser.

Noen mennesker har et sterkt immunforsvar. I dette tilfellet begynner symptomene på sykdommen først i de senere stadiene. Når immuniteten svekkes, oppstår symptomene i begynnelsen av sykdommen.
Tuberkulose utvikler sakte og gradvis:

  • Primær form.
    Utvikler umiddelbart etter infeksjon. De viktigste symptomene på dette stadiet er hovne lymfeknuter.
  • Latent (latent form).
    Utbruddet av sykdommen er preget av fravær av symptomer. Videre vises de i form av spesifikk smerte når de puster og hoster, mangel på appetitt, økt svette og rask tretthet. Dette skjemaet kan anses som ikke smittsomt.
  • Åpne skjema.
    Den alvorligste sykdomsformen. For behandling er det nødvendig å beskytte den syke personen fra andre i lukkede medisinske institusjoner. Dette er for å sikre sikkerhet for menneskene rundt dem.
  • Sekundær form.
    Observert som følge av re-infeksjon.

Diagnose av tuberkulose

Deteksjon av sykdommen er komplisert av likheten til de første symptomene med kronisk bronkitt. Den ledende rollen i diagnosen tuberkulose er rettidig å ta tester fra potensielle pasienter. Så hvis en pasient mistenkes for tuberkulose, utføres sputumforskning. For å gjøre dette samles sputum i løpet av dagen og sendes til et laboratorium for å oppdage mykobakterier.

Det skal bemerkes at diagnosen tuberkulose har andre metoder for å undersøke pasientene.

De mest effektive måtene å diagnostisere sykdommen er:

  1. B / x blodprøve;
  2. Urinanalyse;
  3. Sputumanalyse;
  4. Mantoux test, Pirque;
  5. CT (computertomografi);
  6. Serologiske blodprøver (ELISA, PCR);
  7. bronkoskopi;
  8. biopsi;
  9. Pleural punktering;
  10. røntgen;
  11. Gjennomlysning.

Det er verdt å merke seg at tuberkulose er ledsaget av en økning i konsentrasjonen av kolesterol, lysozym, urinsyre og Cu i blodserum. Basert på dette kan alle endringer i tuberkulose være svært spesifikke.

Hver form for sykdommen varierer i løpet av kurset, alvorlighetsgrad, diagnose og behandling. Derfor, når de første symptomene dukker opp, bør du umiddelbart konsultere en lege og ikke selvmedisinere. Siden du bare kan forverre situasjonen og forverre tilstanden din.

For tiden er det mange legemidler som effektivt bekjemper tuberkulosens forårsakende middel. Den ledende rollen i utvinning av en person spilles av rettidig diagnose og kompetent terapi. Også den generelle tilstanden til pasienten avhenger av gjenopprettingsprosessen etter sykdommen. Således, hvis du overholder alle medisinske anbefalinger, kan du redusere risikoen for re-infeksjon.

Laboratoriediagnose av tuberkulose

Tuberkulose er en sykdom som er lett å diagnostisere i dagens forhold og vitenskapelige prestasjoner. Laboratoriediagnostisering av tuberkulose er sentral for andre diagnostiske metoder, andre bare for røntgenmetoder.

Fullstendig blodprosent

Hos pasienter med tuberkulose er endringer i den generelle blodprøven ikke patognomoniske. Med begrensede og inaktive former for tuberkulose er hypokromi av erytrocytter typisk for deres normale antall. Ved massiv infiltrering eller caseøs lungebetennelse, med utbredt kardesslymfadenitt, er spesielle lesjoner i tarmene, samt med store lunge- eller postoperative blødninger, erytropeni og mikrocytose, oligokromasi, polychromasi, notert. Makrocytose, og enda mer poikilocytose er mye mindre vanlig, vanligvis med alvorlig anemi. Antall retikulocytter med kompensert stadium av tuberkulose varierer fra 0,1 til 0,6%, med subkompensert - fra 0,6 til 1,0%, og 1% retikulocytter er karakteristiske for dekompensert.

I tilfeller av tuberkulose kan moderat leukocytose (opptil 15 000 leukocytter) iakttas i noen tilfeller, mindre ofte leukopeni, som finnes i 2-7% av tilfellene hos pasienter med begrensede og lettgående prosessformer og i 12,5% - i destruktive og progressive lungetuberkulose.

Ofte forekommer skift i leukocyttformelen. Både relativ og absolutt nøytrofili, moderat leukocyttforskyvning til venstre til promyelocytter er notert. Myelocytter forekommer svært sjelden når det gjelder ukomplisert tuberkulose. Økningen i antall nøytrofiler med patologisk granularitet i hemogrammet til en pasient med tuberkulose indikerer alltid varigheten av prosessen: Hos pasienter med alvorlig tuberkulose inneholder nesten alle nøytrofile patologisk granularitet. Når et tuberkuløst utbrudd avtar, kommer atomforskyvningen til normalhet relativt raskt. Patologisk nøytrofilgranularitet varer vanligvis lengre enn andre endringer i hemogrammet.

Innholdet av eosinofiler i det perifere blodet varierer også avhengig av fase i prosessen og den allergiske tilstanden til kroppen. Antallet av dem reduseres til en aneosinofili under alvorlige og langvarige utbrudd av sykdommen og omvendt øker med resorpsjon av infiltrater og pleural effusjon, så vel som med tidlige former for primær tuberkulose.

De fleste former for primær tuberkulose er ledsaget av lymfopeni, noe som iblant observeres i flere år, selv etter at det har skjedd enkelte endringer. Sekundær tuberkulose i den akutte fasen, avhengig av alvorlighetsgraden av prosessen, kan være ledsaget av enten et normalt antall lymfocytter eller lymfopeni.

Blant testene for å vurdere tuberkuløs prosess, er et spesielt sted okkupert ved bestemmelsen av erytrocytt sedimenteringshastigheten (ESR), som er viktig for å vurdere tuberkuloseprosessen og identifisere aktive former. En økning i ESR indikerer tilstedeværelsen av en patologisk prosess (infeksiøs inflammatorisk, purulent, septisk, hemoblastose, Hodgkin's sykdom, etc.) og tjener som en indikator for alvorlighetsgraden, men normale ESR indikatorer indikerer ikke alltid fraværet av patologi. Erytrocytsedimentering akselereres av en økning i innholdet av globuliner i blodet, fibrinogenet, kolesterolet og en reduksjon av blodviskositeten. Sakte av erytrocytsedimentering er karakteristisk for forhold som involverer hemokoncentrasjon, en økning i innholdet av albumin og gallsyrer.

Hemogram hos pasienter med tuberkulose endres under behandlingen. Hematologiske endringer forsvinner jo raskere, desto mer vellykket terapeutisk intervensjon. Imidlertid bør det tas hensyn til effekten på hematopoiesis av ulike antibakterielle stoffer. De forårsaker ofte eosinofili, i noen tilfeller - leukocytose, og oftere leukopeni opp til agranulocytose og lymfoid-retikulær reaksjon. Systematisk hematologisk kontroll og korrekt analyse av dataene som er oppnådd, er essensielle for å vurdere pasientens kliniske tilstand, dynamikken i prosessen og effektiviteten av den anvendte behandlingen.

Urinanalyse

Med tuberkulose i urinveiene er urintesting den viktigste laboratoriediagnostiske metoden. Du kan observere leukocyturi, erytrocyturi, proteinuri, hypoisostenuri, mycobacterium tuberkulose, ikke-spesifikk bakteriuri.

Leukocyturi er det vanligste symptomet på tuberkulose i urinsystemet før spesifikk kjemoterapi, og er kun fraværende i unntakstilfeller, for eksempel med fullstendig utrydding av urinlederens lumen. Nechiporenko-testen (bestemmelse av antall leukocytter i 1 ml urin) bidrar til å objektivt vurdere graden av leukocyturi i nephrotuberculosis, og i noen tilfeller identifisere den ved normal urinanalyse. Det må imidlertid tas i betraktning at leukocytouri kan være i akutt og kronisk pyelonefrit, cystitis, uretitt, stein i nyrene og urinledere.

Eritrotsiturii. som leukocyturi. Det regnes som et av de vanligste laboratorie tegnene på tuberkulose i genitourinary systemet. Hyppigheten av hematuri avhenger av utbredelsen av prosessen, den øker med utviklingen av den destruktive tuberkuløse prosessen i nyrene. Erytrocyturia uten leukocyturi er mer karakteristisk for de tidlige stadier av nyre tuberkulose. Hematuri, som hersker over leukocyturi, er et viktig argument til fordel for nyre tuberkulose i sin differensiering med ikke-spesifikk pyelonefrit.

Biokjemisk blodprøve

I tuberkulose er endringer i enkelte biokjemiske parametere avhengig av fase i prosessen, komplikasjoner og ulike sammenhengende sykdommer. Hos pasienter med inaktiv tuberkulose i lungene og andre organer, endres ikke de totale protein- og proteinfraksjonene av blodserum og bestemmer normalt innhold.

I akutte former av sykdommen, samt i forverring og progresjon av kroniske former for tuberkulose, reduseres albumin-globulinkoeffisienten.

Vesentlig ved vurdering av funksjonell tilstand og organisk skade på leveren i tuberkulose og komplikasjoner er bestemmelsen i serum av direkte og totalt bilirubin, aspartataminotransferase (ACT), alaninaminotransferase (ALT). Dynamisk bestemmelse av nivået av aminotransferaser. bilirubin ved behandling av pasienter med tuberkulose, spesielt i alvorlige former, er en obligatorisk komponent i den biokjemiske undersøkelsen av pasienter med tuberkulose og utføres månedlig.

Evaluering av nyres funksjonelle tilstand inkluderer bestemmelse av serumkreatinin og beregning av glomerulær filtreringshastighet ved bruk av Cockroft-Gault-formelen. Beregning av glomerulær filtreringshastighet ved hjelp av Reberg-testen gir mindre nøyaktige resultater.

Hovedmålet med dynamiske biokjemiske studier av pasienter med tuberkulose er å kontrollere løpet av prosessen, identifisere bivirkninger av medisiner i tide og tilstrekkelig korreksjon av de resulterende forstyrrelsene i homeostase.

Bruk av biokjemiske forskningsmetoder for ekstrapulmonell tuberkulose

Den mest informative indikatoren vurderer innholdet av tuberkulostearinsyre i biologiske væsker, men definisjonen er fulle av tekniske vanskeligheter (behovet for å bruke gaskromatografi og massespektrometri).

Det er lovende å måle aktiviteten av adenosin deaminase, et enzym som oppdages i væsker: synovial, perikardial, ascitisk eller cerebrospinal. De viktigste produsentene av adenosin deaminase er lymfocytter og monocytter. Bestemmelsen av aktiviteten av adenosin deaminase i biologiske væsker letter diagnosen tuberkulær synovitt, tuberkulose av lymfeknuter, tuberkuløs meningitt, tuberkulose serositis.

Noen biokjemiske parametere på grunn av deres ikke-spesifisitet bestemmes bare i biologiske væsker nær lesjonen. Nivået på indikatorer måles som respons på subkutan eller intrakutan administrering av tuberkulin (vanligvis før administrering og 48 og 72 timer etter det). Etter dette beregnes graden av økning i nivået av markøren (i%) i forhold til innledningsnivået.

Optimal bestemmelse i urinen av aktiviteten til et organspesifikt enzym-transamidinase, hvis forekomst er kjent med nyreskader av forskjellig art. Studien av transaminidase er begrunnet bare under betingelsene for subkutan administrering av tuberkulin for å forverre lokal inflammatorisk prosess. Transamidinaseaktivitet i urinen bestemmes ved baseline og 24-72 timer etter administrering av 50 TE av tuberkulin. En økning i fermenturi med 2 ganger og mer tillater i 82% av tilfellene å differensiere aktiv tuberkulose av nyrene fra forverring av kronisk pyelonefrit.

Ved kvinnelig genitaltuberkulose bestemmes konsentrasjonene av haptoglobin og malondialdehyd i blodet i den provokerende tuberkulinprøven. Tuberkulin administreres subkutant i en dose på 50 TE, og etter 72 timer utføres en gjentatt biokjemisk studie. I tilfelle tuberkuløs etiologi er graden av økning i nivået av haptoglobin minst 28% og nivået av malondialdehyd - 39% eller mer. Brukes også til å bestemme aktiviteten av adenosindeaminase i peritonealvæske avledet fra Douglas-rom. Punktatet blir undersøkt 72 timer etter intradermal administrering av tuberkulin i doser på 0,1 TE og 0,01 TE i projeksjonsområdet av de indre kjønnsorganene på den fremre bukvegg. Til fordel for tuberkuløs prosess er en økning i aktiviteten av adenosin deaminase med 10% eller mer sammenlignet med den første en indikativ.

Ved øyeskader undersøkes en fokalreaksjon som oppstår i øyet som svar på antigenstimulering. Samtidig uønsket utvikling av et uttalt svar, ledsaget av en reduksjon i visuelle funksjoner. Siden vurdering av minimal fokalreaksjoner ofte er vanskelig, for å objektivere konklusjonen, anbefales det å fokusere parallelt på graden av økning i serum haptoglobin eller adenosin deaminase.

Alle biokjemiske studier skal utføres i forbindelse med andre metoder.

Blodkoagulasjonstest

Relevansen av den forskning status av blodkoagulasjonssystemet av tuberkulose er forårsaket av tilstedeværelsen av et antall pasienter med lungetuberkulose opphostninger eller lungeblødning, samt hemocoagulation komplikasjoner i kirurgisk behandling av tuberkulose. I tillegg påvirker latent intravaskulær hemokoagulering, som naturlig er sammenhengende med tuberkulose, sykdomsforløpet og effekten av kjemoterapi.

Hos pasienter med pulmonell tuberkulose med overvekt av eksudativ komponent av betennelse, observeres en reduksjon i blodets antikoagulerende aktivitet. Hos pasienter med lav forekomst av en spesifikk lesjon i lungene med overvekt av den produktive komponenten av betennelse, er intravaskulær hemokoagulering ikke særlig uttalt. Hos pasienter med lungetuberkulose med hemoptysis og pulmonal blødning tilstand blodkoagulasjonssystemet er forskjellig: i pasienter med lav blodtap på høyden gemoptoe eller straks etter dens avslutning er det en skarp økning i blodkoagulasjonen evne på grunn av alvorlig intensivering av trombinoobrazovaniya samtidig økt "strukturell" clotting. Hos pasienter med massivt blodtap observeres en reduksjon i koagulasjonspotensialet på grunn av en reduksjon i fibrinogenkonsentrasjon. aktivitet av faktor XIII, trombocyttall. På scenen for kirurgisk behandling hos pasienter med begrensede former for pulmonell tuberkulose, er det ingen signifikante forstyrrelser i homeostasesystemet. Pasienter med felles prosesser når de utfører pneumonim eller pleuropneumonektomi, utvikler ofte DIC, som kan være i form av en "andre sykdom".

For å overvåke tilstanden av blodkoagulasjon i pasienter med lungetuberkulose bør utføres bestemmelse av den aktiverte partielle tromboplastintid (aPTT), fibrinogen, trombin, protrombintid indeks og blødningstiden og koaguleringstid.

Hormonale studier

Moderne eksperimentelle og kliniske observasjoner indikerer tilstedeværelsen av endringer i hormonal status for spesifikk lunge lungebetennelse. Det er bevist at korrigeringen av dysfunksjon av hypofyse-binyre, hypofyse-thyroid-systemer og pankreatisk funksjon i forbindelse med anti-TB terapi bidra til aktivering av fibrogenese og reparasjon på et locus spesifikk inflammasjon.

Den funksjonelle statusen for hypofysen-skjoldbruskkjertelen er vurdert av innholdet i serum av triiodotyronin (T3), tyroksin (T4), skjoldbruskstimulerende hormonhypofyse (TSH). Det har blitt fastslått at subklinisk hypothyroidisme oppdages hos 38-45% av pasientene med lungetuberkulose, og det er oftest diagnostisert i formidlede og fibrøse-cavernøse former av prosessen. Under disse samme formene blir nivåene som T mest drastisk redusert.3,så og t4, og det kommer en ubalanse mellom disse hormonene i form av å øke forholdet T4/ Ts.

Funksjonen av adrenal cortex vurderes av nivået av kortisol i blodserumet og den endokrine funksjon av bukspyttkjertelen ved konsentrasjonen av immunreaktivt insulin. I den akutte fasen av en smittsom sykdom øker behovet for endogen kortisol og insulin. Hyperinsulinemi indikerer også insulinresistens av kroppsvev, som er karakteristisk for enhver aktiv inflammatorisk prosess, spesielt spesifikk. Bestemmelse av glukokortikoidfunksjonen i binyrene med aktiv lungetuberkulose avslører forekomsten av hyperkortikisme hos de fleste pasienter. Normale nivåer av kortisol blodkonsentrasjon hos pasienten med infeksiøs betennelse i den akutte perioden bør betraktes som relativt svikt av glukokortikoid funksjon av binyrebarken som kan tjene som et grunnlag for å holde doser adekvate erstatningsterapi av glukokortikoider.

Nesten en tredjedel av pasientene med lungetuberkulose kan opprettes at deres insulinmineminivå er ganske lavt og nærmer seg den nedre grensen til normen, mens 13-20% ser signifikant hyperinsulinisme. Både relativ hypo- og hyperinsulinisme er høyrisikofaktorer for utvikling av karbohydratmetabolismeforstyrrelser av varierende alvorlighetsgrad. Disse endringene i den funksjonelle aktiviteten til pankreas B-celler krever regelmessig glykemisk kontroll hos pasienter med tuberkulose og rettidig forebygging av diabetes. I tillegg. Dette tjener som en ytterligere begrunnelse for bruk av fysiologiske doser insulin i komplisert terapi av tuberkulose.

Generelt er en reduksjon i skjoldbruskhormonnivåer, deres ubalanse, hyperkortisolemi og hyperinsulinisme mest uttalt hos pasienter med alvorlig tuberkuløs prosess, med omfattende lungelesjoner og alvorlige symptomer på tuberkuløs forgiftning.

Mikrobiologisk diagnose av tuberkulose

Mikrobiologiske undersøkelser er nødvendige for å identifisere pasienter med tuberkulose, verifisere diagnosen, overvåke og korrigere kjemoterapi, evaluere behandlingsresultater, med andre ord fra tidspunktet for registrering av en pasient med tuberkulose til fjerning fra registeret.

Alle epidemiologiske programmer og prosjekter er basert på et estimat av antall bakterieekskretter som ikke kan gjøres uten bruk av laboratoriemetoder for påvisning av mycobacterium tuberkulose. Når man undersøker forhandlingsevnen til den såkalte uorganiserte befolkningen, når prosentandelen av bakterielle ekskreger 70 eller mer, noe som gjør laboratoriemetoder ganske effektivt til å identifisere pasienter med tuberkulose blant denne befolkningsgruppen.

Tradisjonelle mikrobiologiske metoder for diagnose av tuberkulose - bakterioskopiske og kulturelle studier. Moderne metoder vurderer dyrking av mycobacterium tuberkulose i automatiserte systemer, PCR. Imidlertid er alle disse metodene nødvendigvis kombinert med klassiske bakteriologiske metoder.

Innsamling av diagnostisk materiale

Effekten av laboratoriestudier er i stor grad avhengig av kvaliteten på det diagnostiske materialet. Overholdelse av reglene for innsamling, lagring og transport av diagnostisk materiale og nøyaktig implementering av algoritmen for undersøkelse av pasienter påvirker direkte resultatet og sikrer biologisk sikkerhet.

For forskning på tuberkulose ved hjelp av en rekke materialer. På grunn av det faktum at TB logkih- mest vanlige form tuberkuløse lesjoner, den grunnleggende materiale for forskning vurdere sputum og andre typer løsbare trakeobronkiale: øvre luftveis sekret som oppnås etter aerosolinhalator: bronkiale vaskevæsker; bronkoalveolære skyller; materiale oppnådd ved bronkoskopi, transtracheal og intrapulmonal biopsi: aspirere fra bronkiene, strupehinnen, ekssudater, uttørking fra sår, etc.

Effektiviteten av forskningen øker dersom de utfører en kontrollert samling av materiale fra pasienten. For å gjøre dette, tilordne et spesielt utstyrt rom eller kjøpe spesielle hytter. Innsamling av materiale er en farlig prosedyre, så du må samle materiale for forskning, etter regler for smittsom sikkerhet.

Materiale for forskning om mycobacterium tuberculosis samles i sterile hetteglass med tett skruede caps for å forhindre forurensing av miljøet og for å beskytte det oppsamlede materialet mot forurensning.

Beholdere for innsamling av diagnostisk materiale må oppfylle følgende krav:

  • må være laget av slagfast materiale;
  • bør smelte lett under autoklavering;
  • være tilstrekkelig volum (40-50 ml):
  • ha en bred åpning for sputuminnsamling (diameter ikke mindre enn 30 mm);
  • å være enkel å bruke, gjennomsiktig eller gjennomskinnelig, slik at du kan vurdere mengden og kvaliteten på den oppsamlede prøven uten å åpne lokket.

For å oppnå optimale forskningsresultater må følgende betingelser være oppfylt:

  • materialinnsamling utføres før kjemoterapi starter
  • Materialet til studien må samles inn før morgeninntaket av mat og narkotika;
  • For forskning er det ønskelig å samle minst 3 prøver av morgensputum. Samle sputum i 3 påfølgende dager;
  • Det samlede materialet skal leveres til laboratoriet så snart som mulig:
  • i tilfelle når det ikke er mulig å levere materialet til laboratoriet umiddelbart, oppbevares det i kjøleskap ved en lufttemperatur på 4 ° C i ikke mer enn 48 timer;
  • Når du transporterer materialet, er det nødvendig å nøye overvåke hetteglassets integritet.

Riktig oppsamlet sputum har en slim eller mucopurulent karakter. Det optimale volumet av den undersøkte delen av sputum er 3-5 ml.

Phlegm er samlet under tilsyn av en medisinsk faglig. Personer som er ansvarlige for å samle sputum, er det nødvendig å overvåke implementeringen av visse regler:

  • Det er nødvendig å forklare pasientens formål med studien og behovet for å hoste opp ikke spytt eller nasopharyngeal slim, men innholdet i dyp luftveiene. Dette kan oppnås som et resultat av produktiv hoste som oppstår etter noen få (2-3) dype puste. Det er også nødvendig å advare pasienten om at han først må skylle munnen med kokt vann for å fjerne hoveddelen av vegetativ mikroflora i munnhulen og matrester som hindrer studiet av sputum;
  • en medisinsk arbeidstaker som deltar i samlingen av sputum, i tillegg til en kappe og lue, må ha på seg en maske, gummihansker og et gummiforkle;
  • står bak pasienten, anbefales han å holde flasken så nært som mulig til leppene og umiddelbart skille sputumet inn i det som det hoster, mens det er nødvendig å sørge for at luftstrømmen er rettet bort fra helsepersonell:
  • Etter at sputuminnsamlingen er fullført, må den medisinske profesjonelle forsiktig lukke hetteglasset med en hette og vurdere mengden og kvaliteten på det oppsamlede sputumet. Deretter merkes flasken og plasseres i en spesiell bix for transport til laboratoriet.

Hvis pasienten ikke avgir sputum, skal natten før og tidlig på morgenen på dagen for innsamling av materialet gis en eksplosjonsmiddel: ekstrakt av Altea medisin (mukaltin), bromhexin, ambroxol, etc. - eller bruk irriterende innånding ved bruk av utstyr installert i oppsamlingsrommet oppspytt. Materiell samlet på denne måten kan ikke bevares og må undersøkes på innsamlingsdagen. For å unngå hans "avvisning" i laboratoriet i retningen, skal du lage et spesielt merke.

Dersom mikrobiologisk undersøkelse ikke utføres i denne institusjonen, skal det samlede diagnostiske materialet leveres sentralt til laboratoriet, underlagt obligatorisk bevaring av materialet mellom leveranser i kjøleskap eller ved bruk av konserveringsmidler. Lever materialet til laboratoriet i forsendelsesbokser som lett kan desinfiseres. Hver prøve må være merket med riktig etikett, og hele batch må fylles ut med vedlagte skjema.

Modeller og hyppighet av undersøkelse av pasienter

Under den første, såkalte diagnostiske undersøkelsen av en pasient for tuberkulose, er det nødvendig å undersøke minst 3 porsjoner av sputum innen 2 eller 3 dager. samlet under tilsyn av medisinsk personell, noe som øker effektiviteten av mikroskopi.

Primær tuberkulose screening skal utføres av alle medisinske diagnostiske institusjoner i helsesystemet. Nylig, for å øke effektiviteten av den primære undersøkelsen, på grunnlag av kliniske diagnostiske laboratorier, har såkalte mikroskopisenter blitt organisert, utstyrt med moderne mikroskoper og utstyr for å sikre epidemisikkerhet.

I TB-anlegg brukes en skjermplan, som innebærer en studie av sputum eller annet diagnostisk materiale i minst 3 ganger innen 3 dager. I løpet av behandlingen utføres mikrobiologiske studier regelmessig, minst en gang i måneden, i fase med intensiv kjemoterapi. Under overgangen til oppfølgingsfasen blir studier utført sjeldnere - i intervaller på 2-3 måneder, mens studienes mangfold er redusert til to.

Funksjoner i samlingen av diagnostisk materiale i ekstrapulmonell tuberkulose

Egenskapen til det patologiske materialet i ekstrapulmonale former for tuberkulose er en lav konsentrasjon av mycobacterium tuberculosis i den, noe som krever mer følsomme metoder for mikrobiologisk forskning, først og fremst metoder for planting på næringsmedium.

I urogenitalt tuberkulose er urin det mest tilgjengelige forskningsmaterialet. Urinprøvetaking bør utføres av en utdannet sykepleier.

Ekstern kjønnsorganer vaskes med såpe og vann eller en svak løsning av kaliumpermanganat. Forsiktig behandle den eksterne åpningen av urinrøret. En middels del av morgenurinen samles i et sterilt hetteglass: hos menn - naturlig, hos kvinner - med et kateter. Urin fra nyrebjelken samles i sterile rør for kateterisering av en eller to nyrer, i sistnevnte tilfelle - alltid separat fra hver nyre. En liten mengde av denne urinen blir sentrifugert, bunnfallet undersøkes.

Hos menn, sæd, punker av testene, blir prostata sekresjoner sentrifugert for å oppnå sediment. Ved enhver lokalisering av en bestemt prosess i kjønnsområdet hos menn, kan massasje av prostata kjertelen bidra til sekresjon av mykobakterieholdige sekreter fra tuberkulose.

Menstrualblod oppsamles fra kvinner ved suging eller ved bruk av en Kafka cap. Det resulterende materialet frigjøres fra røde blodlegemer, vasker det med destillert vann, etterfulgt av sentrifugering. Sediment undersøkt.

Utslipp fra livmorhalsens livmorhalsekanal oppsamles i hvilken som helst beholder eller kappe av Kafka, det vil si at det er ønskelig å akkumulere 1-2 ml patologisk materiale.

Materialet oppnådd under operasjon på nyrene, kjønnsorganer. biopsier, skrapinger fra endometrium, homogenisert. For å gjøre dette, er den plassert i en steril mørtel og grundig knust med steril saks. Steril flodsand tilsettes den resulterende suspensjon i en mengde som er lik massen, deretter tilsettes 0,5-1,0 ml isotonisk natriumkloridoppløsning, og hele er malt for å danne en pastaformig masse ved tilsetning av isotonisk natriumkloridoppløsning (4-5 ml). Da får massen avgjøre i 1-1,5 minutter, supernatanten undersøkes.

Tuberkulose av bein og ledd. Punctate (pus av abscess abscesser), oppnådd med en steril sprøyte, plasseres i en steril beholder og leveres umiddelbart til laboratoriet. Steril pipette, forfuktet med steril isotonisk natriumkloridoppløsning, ta 2-5 ml pus, overfør den til flasken med perler og tilsett ytterligere 2-3 ml isotonisk natriumkloridløsning. Flasken er stengt med en stopper og ristet i spøkelsesapparatet i 8-10 minutter. Den homogeniserte slurry undersøkes.

For fistulære former for osteoartikulær tuberkulose blir pus tatt fra fistelen. Rikelig utslipp samles direkte inn i røret. I tilfelle av svak pus-utslipp, vaskes fistelen med en steril isotonisk oppløsning av natriumklorid, og vaskevannet samlet i et reagensrør eller et tampongrør som er gjennomvåt i pus, sendes til undersøkelse.

Kirurgisk materiale oppnådd under operasjon på bein og ledd, kan bestå av purulent-nekrotiske masser, granuleringer, arr, benvæv, vev av synovialmembraner og andre substrater. Det behandles som i nyre tuberkulose.

Mikrobiologisk undersøkelse av synovialvæske i 3% natriumcitratoppløsning (1: 1 forhold) for å forhindre koagulering utføres umiddelbart etter punktering.

Tuberkulose av lymfeknuter. Pus utvunnet under punktering av lymfeknuter er også undersøkt. som pus av intestinale abscesser. Lymfeknutevev som oppnås under operasjon, biopsier, undersøkes som i andre former for tuberkulose.

Studien av fekale masser for mycobacterium tuberkulose er ekstremt sjelden på grunn av nesten fullstendig fravær av positive resultater.

Mikroskopi mykobakterier

Sputummikroskopi er en relativt rask, enkel og billig metode som bør brukes i alle tilfeller av mistanke om tuberkulose. I tillegg utføres denne studien for å vurdere effekten av kjemoterapi og å etablere utvinning eller et mislykket resultat av behandlingen i fravær av kulturresultater.

Bruk 2 metoder for mikroskopisk undersøkelse:

  • direkte mikroskopi metode når et smear prepareres direkte fra et diagnostisk materiale;
  • Mikroskopi-metode for sediment fremstilt fra dekontaminert materiale for kultur.

Den første metoden brukes i laboratorier hvor det kun utføres mikroskopiske undersøkelser (kliniske diagnostiske laboratorier i det generelle medisinske nettverket).

De beste resultatene av mikroskopisk undersøkelse oppnås ved å konsentrere det diagnostiske materialet (for eksempel ved sentrifugering).

For å oppdage mycobacterium tuberculosis med 50% sjanse for mikroskopi, bør 1 ml sputum inneholde mer enn 5000 mikrobielle celler. Slemmen hos pasienter med pulmonale former for tuberkulose inneholder vanligvis en betydelig mengde syrebestandige bakterier, som gjør at de kan identifisere dem trygt under bakterioskopi. Den diagnostiske følsomheten til denne metoden kan forbedres ved å undersøke flere sputumprøver fra en pasient. En negativ bakterioskopi utelukker ikke en diagnose av tuberkulose, fordi noen pasients sputum inneholder mindre mykobakterier enn det som kan detekteres ved mikroskopi. Dårlig forberedelse av sputumutslett kan også være årsaken til en negativ bakterioskopisk undersøkelse.

Den vanligste metoden for å oppdage syrefaste mykobakterier i et smear er fargestoffer i henhold til Ziehl-Nelsen. Metoden er basert på penetrasjon av karbolfukarin inn i mikrobialcellen gjennom membranen, som inkluderer et vokslipidlag, med samtidig virkninger av oppvarming og en sterk etseffekt av fenol. Den etterfølgende misfarging av smeten med en 25% løsning av svovelsyre eller 3% saltsyre fører til misfarging av alle ikke-syrefaste strukturer. Blekte smøreelementer er farget med en 0,3% oppløsning av metylenblå. Mykobakterier oppfatter ikke de vanlige anilinfarvestoffene, noe som resulterer i at de syrebestandige mykobakteriene er malt i bringebærrød farge og andre mikrober og cellulære elementer - i blått.

For å undersøke smører farget med Zilu-Nelsen, brukes et lett kikkertmikroskop med et nedsenkingsmål (90 eller 100 ganger forstørrelse) og et okular med 7 eller 10 ganger forstørrelse. Undersøk 100 synsfelt, som er nok til å identifisere i smarte enkelt mykobakterier. I tilfelle at resultatet av en slik undersøkelse er negativ, anbefales det å vise ytterligere 200 synsfelt for å bekrefte. Ta opp resultatene, indikerer antall oppdagede syrefaste mykobakterier (CUM).

I tillegg til denne teknikken brukes fluorokromer til fluorescensmikroskopi, noe som gjør det mulig å oppnå de beste resultatene. Bruken av denne metoden øker effektiviteten av mikroskopien med 10-15%. Ved behandling av mycobacterium med luminescerende fargestoffer (auramin, rhodamin, etc.), er disse stoffene også forbundet med vokslignende strukturer i den mikrobielle cellen. Når en malte celle bestråles med en spennende lyskilde (et visst spektrum av ultrafiolett stråling), begynner de å lyse oransje eller lyse rødt lys mot en svart eller mørkegrønn bakgrunn. På grunn av den høye lysstyrken og kontrasten til det synlige bildet, er det mulig å redusere den samlede forstørrelsen av mikroskopet med 4-10 ganger, noe som øker synsfeltet og reduserer visningstidspunktet for preparatet. Sammen med dette, på grunn av en mye større dybdeskarphet, er det mulig å øke studienes komfort.

Når du bruker fluorescensmikroskopi, tar det mye mindre tid å se det samme området av et smear enn ved lysmikroskopi av smører farget med Tsil-Nelsen. Hvis en mikroskopiker ser på en arbeidsdag på omtrent 20-25 slike smører, bruker han fluorescensmikroskopi, kan han undersøke mer enn 60-80 prøver på samme tid. Erfarne mikroskopere vet at cellefarging med en blanding av auramin og rhodamin er på en eller annen måte spesifikk for syrefaste mykobakterier, som i dette tilfellet har utseendet på gyldne pinner. Saprofytter er farget grønt.

En annen viktig fordel ved metoden for fluorescensmikroskopi er evnen til å detektere modifiserte mykobakterier som har mistet seg under påvirkning av en rekke ugunstige faktorer, særlig intensiv kjemoterapi, egenskapen til syrebestandighet og detekteres ikke i denne forbindelse når de er farget med Tsil-Nelsen.

Ulempene ved fluorescensmikroskopi inkluderer den relativt høye kostnaden for mikroskopet og dens drift. Imidlertid er det i sentraliserte eller andre store laboratorier, hvor lasten overstiger graden av 3 teknikere som arbeider med tre konvensjonelle mikroskoper, istedenfor å bruke et enkelt fluorescensmikroskop.

Bakterioskopiske metoder har ganske høy spesifisitet (89-100%). Om lag 97% av de positive resultatene som er oppnådd ved en hvilken som helst metode for mikroskopi, bekreftes utvetydig av resultatene av sådd.

Det bør bemerkes at mikroskopisk undersøkelse av et smet av et patologisk materiale ikke kan bestemme arten av identifiserte syrefaste mykobakterier. Metoden for mikroskopi gjør det mulig for oss å konkludere bare om tilstedeværelsen eller fraværet av syrefaste mikroorganismer i preparatet, noe som forklares av eksistensen i naturen av et stort antall tuberkulose-ikke-tuberkulære syrefaste mikroorganismer som er morfologisk lik mykobakterier.

Evaluering av resultatene av mikroskopi produsert i halvkvantitative enheter.

For å kunne sammenligne resultatene fra forskjellige metoder for mikroskopi, innføres empiriske koeffisienter. For eksempel for å sammenligne resultatene av et smear farget med fluorescerende fargestoffer med lysmikroskopiedata (1000x forstørrelse), er det nødvendig å dele antall syrefaste mykobakterier detektert av et fluorescerende mikroskop ved den tilsvarende faktor ved en 250x forstørrelse av mikroskopet med 10, med 450 ganger - ved 4, med 630 ganger - ved 2.

Egenskaper av mikroskopi i ekstrapulmonell tuberkulose

Direkte mikroskopi utføres, samt smearmikroskopi fremstilt etter anrikning, etterfulgt av Zill-Nelsen-farging eller luminescerende fargestoffer. Direkte smearmikroskopi er ineffektiv på grunn av den lave konsentrasjonen av mykobakterier i materialet, og derfor er det mer rasjonelt å bruke anrikningsmetoder. Sentrifugering er mest effektiv. Hvis det biologiske materialet er viskøst, blir sentrifugering påført med samtidig homogenisering og flytdannelse av materialet, som utføres ved bruk av høyhastighets sentrifuger med en sentrifugalkraft på 3000 g og hypoklorittløsninger. Andre anrikningsmetoder, for eksempel mikroflotasjon, brukes for tiden ikke på grunn av dannelsen av biologisk farlige aerosoler.

Kulturell metode for diagnose av tuberkulose

Seedmetoden, eller kulturmetoden, er mer følsom enn smørmikroskopi, og har flere fordeler i forhold til sistnevnte. Det gjør det mulig å oppdage flere titalls levedyktige mykobakterier i det studerte materialet og har en stor diagnostisk verdi. Dette er spesielt viktig i studien av materiale fra nylig diagnostiserte eller behandlede pasienter som utskiller en liten mengde mykobakterier.

Sammenliknet med mikroskopi, kan en kulturstudie øke antall identifiserte tuberkulosepasienter med mer enn 15-25%, og bekrefte også tuberkulose i tidligere stadier, når sykdommen fortsatt er godt behandlingsbar. En svært viktig fordel ved kulturforskning er muligheten til å oppnå en patogenkultur, som kan identifiseres og studeres i forhold til stoffets følsomhet, virulens og andre biologiske egenskaper.

Ulempene med dyrking metoder inkluderer deres varighet (ventetiden for materialer når 10 uker). høyere kostnader, behandling av kompleksiteten til det diagnostiske materialet.

Prinsipper for presowing behandling av diagnostisk materiale

Konvensjonelle mikrobiologiske teknikker kan ikke brukes i forskning på tuberkulose. Dette skyldes det faktum. at mycobacterium tuberculosis vokser veldig sakte, og de fleste av prøvene av klinisk materiale inneholder raskt voksende pyogene og putrefaktive mikroorganismer, sopp. Deres raske vekst på rike næringsmedier hindrer utviklingen av mykobakterier og tillater ikke å isolere tuberkulose forårsakende middel. Derfor må det diagnostiske materialet forbehandles før sådd. I tillegg er mykobakterier utgitt fra pasientens luftveiene vanligvis omgitt av en stor del av mucus, noe som gjør det vanskelig å konsentrere seg. I dette henseende er det nødvendig å fordøye og dekontaminere før spising og andre lignende materialer.

Alle vaskemidler og dekontaminanter har en mer eller mindre uttalt toksisk effekt på mykobakterier. Som et resultat av behandling kan opptil 90% mykobakterier dø. For å bevare en tilstrekkelig del av mykobakterien, er det nødvendig å bruke milde behandlingsmetoder som på den ene side tillater å undertrykke raskt voksende pyogene og putrefaktive mikroorganismer, og på den annen side for å bevare levedyktigheten av mykobakteriene tilstede i materialet.

Avhengig av materialet, dens homogenitet og forurensning, er forskjellige dekontaminanter brukt til presowing behandling: For sputum - natriumhydroksidoppløsning 4%, oppløsninger av tre-substituert natriumfosfat 10%, benzalkoniumklorid trinatriumfosfat, NALC-NaOH (N-acetyl-L-cystein- natriumhydroksyd) med en endelig NaOH-konsentrasjon på 1%, for urin og andre flytende materialer - en løsning av svovelsyre 3%, for forurensede prøver, fettholdige materialer - en løsning av oksalsyre opptil 5%. I tillegg, i noen tilfeller, bruk enzymer, overflateaktive midler (vaskemidler). Bruken av tween og noen andre vaskemidler er ledsaget av mindre død av mycobakterielle celler (40-50% overlever). De kan imidlertid bare brukes til flytende materialer. Den mest utbredt i verden mottok NALC-NaOH. utgitt i sett. Denne metoden gjør det mulig å isolere mer enn 85% av mycobakterielle cellepopulasjoner. Dekontaminering av vevholdige faste materialer er vanskeligere, siden det er vanskelig å gjette graden av spredning av materialet i homogeniseringsprosessen. For eksempel leds behandlingen av biopsiprøver av lymfeknuter ofte med økt hyppighet av forurensning med fremmed flora. I dette tilfellet kan 1% etonium brukes.

Ikke-homogen materiale homogeniseres ved hjelp av glassperler i nærvær av dekontaminanter. Flytende materialer blir pre-sentrifugert og bare sediment behandles.

Såings- og inkubasjonsteknikker

Etter forbehandling blir materialet sentrifugert, på grunn av at mykobakteriene utsettes og deres innhold i sedimentet økes ("sedimentberigelse"). Det resulterende bunnfallet blir underkastet nøytralisering og podet med det (podet) overflaten av tette næringsmedier eller reagensrør med flytende (halvflytende) medium. Fra den gjenværende delen av sedimentet er smear forberedt på mikroskopisk undersøkelse. Såingsteknikken bør forhindre kryskontaminering av det diagnostiske materialet.

For pålitelig klinisk tolkning av resultatene av mikrobiologisk forskning er det nødvendig å observere følgende regel: Mikroskopiske og kulturelle studier skal utføres parallelt fra samme utvalg av diagnostisk materiale.

Inokulerte rør plasseres i en termostat ved 37 o C i 2 dager i horisontal stilling. Dette gir en mer jevn absorpsjon av materialet i næringsmediet. Etter 2 dager overføres rørene i vertikal stilling og hermetisk forseglet med gummi- eller silikonpropper for å forhindre at de podede medier tørker ut.

Beskjær holdt i en termostat ved 37 o C i 10-12 uker med vanlig ukentlig visning. Med hver testvisning registreres følgende parametere:

  • sikt visuelt observert fra datoen for såddvekst;
  • vekstraten (antall CFU);
  • forurensning av planting med fremmed mikrobiell flora eller sopp (slike rør fjernes);
  • ingen synlig vekst. Rørene er igjen i termostaten til neste visning.

Næringsmedium

For dyrking av mykobakterier ved bruk av forskjellige næringsmedier; tett, halvflytende, flytende. Imidlertid har ingen av de kjente næringsmediene egenskapene som sikrer veksten av alle mycobakterielle celler. I denne forbindelse, for å forbedre ytelsen, anbefales det å bruke samtidig 2-3 næringsmedia av forskjellig sammensetning.

Som et standardmedium for primærisolering av tuberkulose-årsaksmidlet og bestemmelsen av stoffets følsomhet, anbefaler WHO Lowenstein-Jensen medium. Dette er et tett eggmedium hvor veksten av mykobakterier oppnås på 20-25 dag etter sådd av bakterioskopisk positivt materiale. Avlinger av bakterioskopisk negativt materiale krever en lengre inkubasjonsperiode (opptil 10-12 uker).

I vårt land er den foreslåtte distribusjonen av E.R. Finn Egg Medium Finn II. Det adskiller seg i at i stedet for L-asparagin bruker det mononatriumglutamat, som utløser andre måter å syntetisere aminosyrene av mykobakterier. Vekst fremkommer på dette mediet litt tidligere, og frekvensen av mykobakteriell sekresjon er 6-8% høyere enn på Levenshtein-Jensen medium.

For å forbedre effektiviteten av bakteriologisk diagnose av ekstrapulmonell tuberkulose, anbefales det å inkludere Finn-II modifiserte medier i næringsmediet. For å øke veksten tilsettes natriumtioglykolat (0,05%) til næringsmediet Finn-II, noe som reduserer oksygenkonsentrasjonen. For å beskytte mykobakterielle enzymsystemer fra giftige produkter av lipidperoksydasjon, blir a-tokoferolacetat-antioxidanten introdusert i næringsmediet Finn-II i en konsentrasjon på 0,001 μg / ml. Såing av diagnostisk materiale produsert ved standardmetoden.

I TB-laboratoriene i Russland benyttes også andre modifikasjoner av faste næringsmedier; foreslått av G.G. Mordovian næringsmedium "New", utviklet av V.A. Anikin næringsmedium A-6 og A-9, etc.

På grunn av det faktum at under kjemoterapi, er forskjellige metabolske systemer i den mikrobielle cellen skadet. En del av mycobakteriepopulasjonen mister sin evne til å utvikle seg normalt på vanlige næringsmedier og krever osmotisk balansert (halvflytende eller flytende) næringsmedium.

Evaluering og registrering av resultatene av såing diagnostisk materiale

Noen stammer og typer mykobakterier vokser sakte, vekst kan vises selv ved den 90. dagen. Antallet av slike avlinger er liten, men det gjør at de tåler avlinger i en termostat i 2,5-3 måneder.

Virulente kulturer av mycobacterium tuberculosis vokser vanligvis på tett eggmedium i form av R-former av kolonier av forskjellige størrelser og arter. Kolonier er tørre, rynket, elfenben, litt pigmentert. I andre miljøer kan kolonier av Mycobacterium tuberculosis være mer fuktig. Etter et kjemoterapi eller i løpet av behandlingen kan glatte kolonier med våt vekst (S-former) frigjøres.

Ved isolering av avlinger brukes et sett med spesielle studier for å skille mycobacterium tuberculosis fra ikke-tuberkuløse mykobakterier og syrefaste saprofytter.

Et positivt svar er gitt etter en obligatorisk mikroskopisk undersøkelse av et smear farget med Zil-Nelsen fra vokst kolonier. I tilfelle veksten av mykobakterier i smør, finnes lyse røde stenger som ligger enkeltvis eller i grupper, og danner klynger i form av filt eller fletninger. I unge kulturer, spesielt de som er isolert fra pasienter behandlet med kjemoterapi i lang tid, er mykobakterier preget av utprøvd polymorfisme, opp til nærvær av korte, nesten coccoid eller langstrakte varianter, som ligner svampmyceliet, sammen med stavformede former.

Vekstraten for mykobakterier er indikert ved følgende skjema: (+) - 1-20 CFU i et reagensrør (skånsom bakteriell utskillelse); (++) - 20-100 CFU in vitro (moderat bakteriell utskillelse); (+++) -> 100 CFU in vitro (rikelig eksplosjon av bakterier). I laboratoriediagnostikk av tuberkulose er det ikke nok å gi svar, om mycobacterium er oppdaget med denne eller den samme metoden. ha en detaljert forståelse av volum og natur av mykobakteriepopulasjonen, dens sammensetning og egenskaper. Det er disse dataene som gjør det mulig å korrekt tolke prosessens tilstand, planlegge taktikk og raskt rette behandlingen.

I de senere årene, for å akselerere veksten av mykobakterier, er næringsmedier på agarbase med forskjellige veksttilskudd og bruk av en spesiell gassblanding blitt foreslått. For å oppnå veksten av mykobakterier i disse miljøene under dyrking, skape en atmosfære med høyt innhold av karbondioksid (4-7%). Til dette formål, bruk spesiell MED2-inkubatorer. Men de mest utviklede automatiserte systemene for dyrking av mykobakterier: MGIT-BACTEC-960 og MB / Bact.

Et slikt system er MGIT-systemet (mycobacteria growth indicating tube), som tilhører utviklingen av høyteknologi og er utformet for å akselerere den bakteriologiske diagnosen av tuberkulose og bestemme følsomheten til mycobakterier til førstegangs-legemidler og noen andre linjer. MGIT er fokusert på å bruke den som en del av VASTES-960-enheten. Mikroorganismer dyrkes i spesielle rør med flytende næringsmedium på basis av det modifiserte medium Middlebrook-7H9. For å stimulere veksten av mykobakterier og hemme veksten av fremmed mikroflora, brukes MGIT Growth Supplement veksttilskudd og en blanding av antibakterielle legemidler PANTA.

Registreringen av veksten av mikroorganismer utføres optisk. Det er basert på fluorescens som skyldes oksygenforbruket av mykobakterier i vekstprosessen. Et oksygenavhengig fluorokromfargestoff er inneholdt i bunnen av et spesielt reagensrør og er belagt med et silisiumlag. Reproduksjon av mykobakterier fører til en reduksjon i mengden oksygen i røret og en reduksjon i konsentrasjonen, noe som medfører en økning i fluorescens, som blir synlig når røret blir bestrålt med ultrafiolett lys og automatisk oppdages av fotoresensorer innebygd i VASTES-960-enheten. Intensiteten av gløden registrert i vekstenheter (GU-vekst-enheter). Vekstdata er inngått i en datamaskin hvor den kan lagres automatisk. Dataanalyse av vekstkurver kan gi informasjon om tilstedeværelsen av forskjellige mykobakterielle bassenger, inkludert ikke-tuberkuløse, og bidrar også til å vurdere vekstegenskapene til mykobakterier.

Som et resultat av innføringen av slike systemer ble tiden for utseende av veksten av mykobakterier signifikant redusert, i gjennomsnitt 11 dager på WASTES-960 og 19 dager på MB / Bact versus 33 dager på et standard tett næringsmedium. Det skal bemerkes at disse systemene krever høyt kvalifisert personell. Såningsmateriale på flytende medier må ledsages av såing på Levenshteyn-Jensen medium, som spiller rollen som en stand-in i tilfeller der tuberkulose ikke gir vekst på andre medier.

Bestemmelse av mykobakterieres narkotikafølsomhet

Bestemmelse av mykobakteriens spekter og grad av følsomhet overfor anti-tuberkulosemedisiner er av klinisk betydning, samt for den epidemiologiske vurderingen av spredningen av stoffresistent tuberkulose. I tillegg tillater overvåking av stoffresistens å evaluere effektiviteten av tuberkulose-programmet som helhet, som er en integrert indikator for arbeidet med alle komponentene av tuberkulose-tiltak.

Multiplikasjon og timing av narkotikafølsomhet:

  • før starten av behandlingen en gang for å bestemme strategien og taktikken for behandlingen:
  • når isolering fra pasientkulturer fra forskjellige materialer (sputum, BAL, urin, ekssudater, cerebrospinalvæske, etc.) undersøkes alle isolerte stammer:
  • ved slutten av den intensive behandlingsfasen i fravær av klinisk og radiologisk dynamikk:
  • om nødvendig, endre behandlingsregime i tilfelle av:
    • mangel på sputum negativitet;
    • re-kultur etter sputum negativitet;
    • en kraftig økning i antall KUM i et smør etter den første reduksjonen. Det er velkjent at stammer av Mycobacterium tuberculosis som er heterogene i form av stofffølsomhet, isoleres fra materialet fra en pasient med tuberkulose. Stammenes følsomhet overfor anti-tuberkulosemedisiner kan variere innen rekkevidde av narkotika, graden, frekvensen og motstanden.

Grad av stoffresistens av Mycobacterium tuberculosis bestemmes i samsvar med fastsatte kriterier, som er fokusert på den kliniske signifikansen av resistens og avhenger av stoffets anti-tuberkuloseaktivitet, dets farmakokinetikk og konsentrasjon i lesjonen. maksimal terapeutisk dose og så videre.

Bestemmelse av mykobakteriens narkotikafølsomhet utføres for tiden ved mikrobiologiske metoder:

  • absolutte konsentrasjoner (fortynningsmetode på fast eller flytende næringsmedium),
  • proporsjoner,
  • motstandskoeffisient.

Motstand manifesterer seg vanligvis i form av visuelt observert vekst av kolonier av Mycobacterium tuberculosis, men det er teknikker som fremkaller vekst i de tidlige stadier av delingen av Mycobacterium-celler i form av fargereaksjoner. Disse metodene reduserer testtiden fra 3-4 til 2 uker.

Metoden for absolutte konsentrasjoner anbefalt av WHO Chemotherapy Committee, som er metodologisk den enkleste, men krever høy standardisering og nøyaktighet av laboratorieprosedyrer, har blitt utbredt i Russland. Medisinens følsomhetstest består av et sett med rør med næringsmedium modifisert med anti-tuberkulosemedisiner. Kittet består av 2-3 rør med forskjellige konsentrasjoner av hver av de brukte legemidlene, ett kontrollrør med medium uten legemiddel og ett rør som inneholder 1000 μg / ml natriumsalicylat eller 500 μg / ml para-nitrobenzoesyre for å oppdage veksten av ikke-tuberkuløse mykobakterier.

For fremstilling av et sett medie med rusmidler ved bruk av et modifisert medium Lowenstein-Jensen (uten stivelse), som helles i kolber. I hver av kolber legger du til en viss mengde av riktig fortynning av anti-TB-legemidlet. Innholdet i kolber blandes grundig, helles i reagensrør og rulles i skrå stilling i 40 minutter ved en temperatur på 85 ° C. Det anbefales å koagulere mediet i en elektrisk skrutrekker med automatisk temperaturregulering. Medium med anti-tuberkulose medisiner

Første rad kan lagres i kjøleskap ved 2-4 ° C i 1 måned, med 2dre raddroger - ikke mer enn 2 uker. Lagringsmedier med legemidler ved romtemperatur er uakseptable. Ved utarbeidelse av oppløsninger av anti-tuberkulosemedisiner, tas deres aktivitet i betraktning, beregning av konsentrasjonen, justert for molekylvekten av den ikke-spesifikke delen av legemidlet, renhet etc. For å bestemme stoffets følsomhet ved å bruke bare kjemisk rene stoffer.

Prinsippet for metoden består i å bestemme konsentrasjonen av anti-tuberkulose-legemidlet, som hemmer veksten av en betydelig del av mykobakteriepopulasjonen. Når den er riktig utført, har denne metoden god nøyaktighet.

Før testingen er det nødvendig å sørge for at den valgte kulturen av Mycobacterium tuberculosis ikke har ekstern mikroflora. Fra en kultur av mykobakterier i en 0,9% oppløsning av natriumklorid, fremstilles en homogen suspensjon som inneholder 500 millioner mikrobielle celler i 1 ml (optisk turbiditetsstandard på 5 enheter). Den resulterende suspensjon fortynnes med 0,9% natriumkloridoppløsning (1:10) og 0,2 ml suspensjon tilsettes til hvert rør av et sett med kulturmedium. Såde rør plasseres i en termostat ved 37 ° C og holdes i en horisontal stilling i 2-3 dager, slik at den avfasede overflaten av næringsmediet blir jevnt inokulert med en suspensjon av mycobacterium tuberculosis. Deretter overføres rørene til vertikal stilling og inkuberes i 3-4 uker. Resultatmåling utføres i 3-4 uker.

Siden tidspunktet for isolering av et patogen fra klinisk materiale på næringsmedia er minst 1-1,5 måneder, kan resultatene av bestemmelse av medikamentfølsomhet ved denne metoden oppnås ikke tidligere enn 2-2,5 måneder etter sådd av materialet. Dette er en av de viktigste ulempene ved metoden.

Tolk resultatet av å bestemme mykobakteriens narkotikafølsomhet basert på bestemte kriterier. På tett medium anses en kultur for å være følsom for konsentrasjonen av medikamentet som er inneholdt i mediet dersom antall kolonier av mykobakterier som vokser på dette rør med legemidlet, ikke overskrider 20 med rikelig vekst på kontrollrøret uten medikamenter. Kun i nærvær av mer enn 20 kolonier anses kulturen å være resistent overfor denne konsentrasjonen. I praksis, når du mottar resultatene av vekst i testrørene, nær 20 CFU. Det er nødvendig å varsle den kliniske enheten om at følsomheten eller stabiliteten i dette tilfellet er av grenseegenskaper, noe som noen ganger kan forklare den fuzzy dynamikken til kliniske indikatorer.

For ulike legemidler er det etablert en viss konsentrasjon hvor multiplikasjonen av den kritiske mykobakterielle populasjonen observeres. Disse konsentrasjonene kalles "kritisk". Som et stabilitetskriterium benyttes størrelsen av veksten av mykobakteriepopulasjonen på næringsmediet med legemidlet i en kritisk konsentrasjon.

I internasjonal fisiologisk praksis ved bestemmelse av resistens mot narkotika er ikke begrenset til å bestemme kun kritiske konsentrasjoner. Dette skyldes det faktum. at den utvidede bestemmelse av nivået av stoffets resistens mot patogenet gjør det mulig for klinikeren å formulere kjemoterapi-taktikk på en bedre måte ved å bruke kunnskap om den potenserende effekten av narkotikakombinasjoner, for å forutsi kryssresistens eller å anvende mer effektive legemidler av gruppen anti-tuberkulosemedisiner som anvendes.

Metoden for absolutte konsentrasjoner er imidlertid den enkleste, og mest følsomme for feil i implementeringen. Mer pålitelig, spesielt når man bestemmer følsomheten for andrelinjemedisiner, og metoden for proporsjoner er vanlig utenfor Russland. Det tar hensyn til manglene i den absolutte konsentrasjonsmetoden, men det er mer tidkrevende å utføre.

Metoden er svært lik den absolutte konsentrasjonsmetoden. Forberedelse av testrør med legemidler produsert på samme måte. som med den absolutte konsentrasjonsmetoden. Sådosen av en suspensjon av Mycobacterium tuberculosis reduseres imidlertid med 10 ganger. som nivåer frekvensen av spontan motstand av noen stammer av Mycobacterium tuberculosis til rusmidler som ethambutol, protionamid, capreomycin. Som kontroll må du bruke 2 eller 3 rør med en frødose som er lik testrørene, serielt fortynnet 10 og 100 ganger. Kriteriet motstand er andelen av visuelt observert vekst av Mycobacterium tuberculosis. For narkotika av 1. rad er kriteriet for bærekraft det overskytende av veksten på 1% av den opprinnelige populasjonen, for legemidler av 2. rad - vekst på 1 eller mer enn 10% av den opprinnelige, avhengig av den valgte kritiske konsentrasjon.

I 1997 ble arbeidsgruppene for WHO og den internasjonale anti-tuberkuloseunionen for påvisning av anti-tuberkulosemedisinresistens tilpasset disse kriteriene, noe som tyder på at mykobakterier som vokser på det tette eggmediet av Levenshteyn-Jensen, anses å være stabile ved følgende konsentrasjoner:

  • dihydrostreptomycin - 4 μg / ml;
  • isoniazid - 0,2 μg / ml:
  • rifampicin - 40 μg / ml:
  • Etambutol - 2 μg / ml.

I 2001 ble det foreslått kritiske konsentrasjoner for følgende andre legemidler (for en kritisk andel på 1%):

  • capreomycin - 40 μg / ml;
  • protionamid - 40 ug / ml;
  • kanamycin - 30 μg / ml;
  • viomycin - 30 μg / ml;
  • sykloserin - 40 μg / ml;
  • aminosalicylsyre - 0,5 μg / ml;
  • Ofloxacin - 2 μg / ml.

Vekstresultater vurderes etter 4 uker som foreløpig og etter 6 ukers dyrking som endelig.

For å bestemme legemiddelresistensen for pyrazinamid, som er mye brukt i moderne kjemoterapi av tuberkulose, er den anbefalte kritiske konsentrasjonen 200 μg / ml. Imidlertid er det fortsatt ingen generell akseptert metode for å bestemme stoffresistens mot dette legemidlet på faste næringsmedier, siden dets antibakterielle aktivitet manifesteres bare i et surt medium (pH o C;

  • mangel på pigmentdannelse (elfenbenfarge);
  • uttalt syrefast farge;
  • positiv niacindeig;
  • positiv nitratreduktasestest;
  • fraværet av termostabil katalase (68 o C).
  • Mangelen på vekst på miljøet Levenshteyn-Jensen, som inneholder:
    • 1000 μg / ml natriumsalisylat,
    • 500 μg / ml paranitrobenzoesyre,
    • 5% natriumklorid:
  • vekst i nærvær av 1-5 μg / ml tiofen-2-karboksylsyre.
  • Relevansen av differensiering av isolerte mykobakterier vil øke markant med en økning i hyppigheten av registrering av hiv / aids-tilfeller assosiert med tuberkulose eller mykobakterier. For tiden er det ingen absolutt sikkerhet at praktiske regionale laboratorier er klare til å utføre denne mengden arbeid på riktig måte.

    Immunologisk diagnose av tuberkulose

    Det finnes en rekke universelle fenomener, narkotika og immunologiske tester som opprinnelig ble oppdaget under tuberkulose eller på modell av immunresponsen mot mykobakterier. Disse inkluderer BCG og tuberkulin, et fenomen som kutan HRT (tuberkulinprøver - Pirke og Mantoux-reaksjonene), reaksjonen på subkutan administrering av tuberkulin til sensibiliserte dyr (Koch-fenomen). Noen av de første antistoffene i en smittsom sykdom ble også funnet i tuberkulose. Selvfølgelig, jo dypere forståelsen av mekanismene for anti-tuberkuloseimmunitet og deres genetiske kontroll, jo bredere kan det være bruk av immunologiske metoder og legemidler som påvirker immunsystemet for å løse praktiske problemer med fisiologi.

    Det viktigste og vanskeligste praktiske problemet vurderes for øyeblikket å være deteksjon av tuberkulose ved massescreening av befolkningen. Til tross for mange rapporter om "suksesser" (på begrenset materiale) er det imidlertid ingen egnet immunologisk metode (gjengitt i "noen hender") og et preparat for disse formålene.

    Immunologiske metoder, spesielt serologiske studier (bestemmelse av antigener, antistoffer) og tuberkulin-provokerende tester, brukes mye i klinisk praksis.

    For det første blant de immunologiske studiene som brukes i differensialdiagnose, er serologiske metoder - definisjonen av antigener og antistoffer i ulike medier i kroppen.

    Specificiteten av bestemmelsen av antistoffer mot mycobacterium tuberkulose avhenger av antigenene som brukes i immunanalysen. En signifikant mengde antigener er blitt foreslått, den første er tuberkulin PPD:

    • PPD og andre komplekse preparater fra kulturfluidet;
    • ultralyd disintegrat;
    • Triton ekstrakt og andre komplekse preparater av cellevegger;
    • 5 antigen (Daniel);
    • 60 antigen (Coccito);
    • lipoarabinomannan;
    • ledningsfaktor (trehalose-6,6-di-mikolat);
    • fenol og andre glykolipider;
    • lipopolysakkarid;
    • fibronektinbindende antigen;
    • proteiner (oftest rekombinante); 81,65,38,34,30,19,18,16,15,12 KDA og andre.

    Som et resultat av mange års forskning av russiske og utenlandske forskere ble hovedmønstrene av antistoffproduksjon og effektiviteten av serologisk diagnose av tuberkulose avslørt: Jo mer kompleks antigenet er, desto høyere er følsomheten og senker spesifisiteten til testene. Spesifikitet i forskjellige land varierer avhengig av infeksjonen av populasjonen av M. tuberculosis og ikke-tuberkuløse mykobakterier, om vaksinering av BCG, etc. Ved barn er informativiteten til serodiagnose lavere enn hos voksne. I primær tuberkulose (ofte barn) er definisjonen av IgM mer informativ. med sekundær IgG. I HIV-infisert serodiagnostisk informasjon reduseres bestemmelsen av antistoffer. Effektiviteten av bestemmelsen av antistoffer avhenger av en rekke "kliniske øyeblikk": aktiviteten av prosessen (tilstedeværelsen eller fraværet av "isolering" av mykobakterier, tilstedeværelsen av hulrom, infiltreringsgraden), omfanget av prosessen, varigheten av kurset.

    Sensibiliteten til enzymimmunoassay-metoden (ELISA) er ca. 70%. Mangelen på effektivitet av studien skyldes lav spesifisitet. Tidligere ble muligheten for bruk av serologisk screening i høyrisikogrupper, særlig blant personer med post-tuberkuloseendringer i lungene, vurdert.

    For å øke spesifisiteten til ELISA fortsetter søket etter mer spesifikke antigener, inkludert de som oppnås ved genteknologi, ESAT-6 og andre (se ovenfor). Bruken av strengt spesifikke antigener (38 kDa, ESAT) øker spesifisiteten. men reduserer sensitiviteten til analysen betydelig. Sammen med ELISA (eksperimentelle laboratorietestsystemer, for eksempel Pathozyme ELISA-settet), immunokromatografiske sett med lateral filtrering (Mycodot), samt andre lignende tester (dot-analyse på membranen) med visuell vurdering av resultatet av studien, er blitt foreslått. Ved utførelse av disse testene foregår analysen innen 10-30 minutter; de krever ikke spesialutstyr, krever en visuell vurdering av resultatene, som er forbundet med en kjent subjektivitet. Disse metodene har omtrent samme karakteristika for sensitivitet og spesifisitet (henholdsvis 70% og 90-93%) som den tradisjonelle ELISA.

    Bruken av immunanalysemetoder har en viss verdi som en ekstra som tas i betraktning i komplekset av metodene som brukes, i differensialdiagnosen av tuberkulose, spesielt ved diagnosen av ekstrapulmonale former. ELISA er mest effektivt for å diagnostisere tuberkuløs meningitt i studien av cerebrospinalvæske. I dette tilfellet er sensitiviteten til analysen 80-85%, og spesifisiteten er 97-98%. Det er bevis på effektiviteten av bestemmelsen av antistoffer mot mycobacterium tuberkulose i tårevæske ved diagnosen tuberkuløs uveitt.

    Induksjon av syntesen av gamma-interferon in vitro

    Gamma-interferon (IFN-y) er en faktor av spesifikt immunforsvar som realiseres ved aktivering av makrofag-enzymsystemer. Induksjon av syntesen av IFN-y ved sensibiliserte T-lymfocytter forårsaker deres interaksjon med mykobakterielle antigener.

    Som antigener brukes som tuberkulin PPD. og spesifikke antigener oppnådd ved genteknologi, spesielt antigener ESAT-6 (tidlig utskilt antigen med en molekylvekt på 6 kDa) og CFP-10 (proteinkulturfiltrat, 10 kDa). Geneteknikk eller rekombinante antigener er fraværende i cellene i BCG-vaksinen og andre mykobakterier. Ved bruk av tuberkulin er resultatene av IFN-y-induksjonstesten sammenlignbare med resultatene av tuberkulinhudtesten (direkte korrelasjon). Ved bruk av genetisk utviklede antigener er testresultater mer spesifikke og avhenger ikke av tidligere BCG-vaksinasjon. Ved undersøkelse av vaksinerte personer som ikke hadde kontakt med tuberkuloseinfeksjon, er testets spesifisitet 99%. Sensitiviteten til testen hos pasienter med tuberkulose varierer fra 81 til 89%.

    Test og diagnostiske tester basert på kortsiktig dyrkning av helblodceller eller mononukleære celler isolert fra blod med in vitro Mycobacterium tuberculosis antigener med påfølgende bestemmelse av IFN-y konsentrasjon eller beregning av antall T-lymfocytter syntetiserende IFN-y er blitt utviklet. Konsentrasjonen av interferon syntetisert in vitro, bestemt ved ELISA ved bruk av monoklonale antistoffer som binder IFN-y. Deretter bestemmer du ved hjelp av en kalibreringsstandard IFN-y konsentrasjonen i testrøret eller brønnene på tabletten.

    Ved utførelse av Elispot-testen, antall T-lymfocytter som syntetiserer IFN-y. regnet på overflaten av koppen, dekket med antistoffer mot IFN-y.

    Utviklere av diagnostikk basert på induksjon av IFN-y in vitro, som ble godkjent av US Drug and Product Agency, hevder at ved bruk av testen er det umulig å skille mellom latent tuberkuloseinfeksjon fra aktiv tuberkulose. Derfor, i regioner med høyt infeksjonsnivå, har testen ingen direkte diagnostisk verdi. Men i vårt land kan det brukes til å skille tuberkuloseinfeksjoner hos barn fra allergi etter vaksinasjon, samt å vurdere nivået av spesifikk immunitet i behandlingsprosessen.

    I dag studeres det innenlandske testsystemet for å bestemme induksjon av IFN-y-syntese ved spesifikke tuberkuloseantigener in vitro.

    Immunstatus og tuberkuloseforløp, immunkorreksjon

    I prosessen med å behandle tuberkulose hos mennesker, er det endringer i antigenemi og tilstanden i immunsystemet.

    Data om endringer i ekssudater og vev er i stor grad motstridende. Det eneste som kan bemerkes med god grunn er at et betydelig antall aktiverte T-lymfocytter vanligvis finnes i tuberkulære granulomer.

    Det er fornuftig å dvele på to punkter som er nødvendige for å forstå rollen som immunologiske mekanismer ved behandling av tuberkulose hos mennesker:

    • AIDS-pasienter har en særlig høy forekomst av multidrugsresistens;
    • i tilfelle multidrugsresistens (og i fravær av HIV-infeksjon), er nedsatt immunitet (primært T-celle linken) spesielt signifikant.

    I tuberkulose er ulike metoder for immunokorreksjon mye brukt: disse er primært legemidler som primært virker på T-celleimmunitet og systemet med mononukleære fagocytter (tymushormoner, isofon, laktopid, polyoksidonium, etc.). samt hele (dempet) mykobakterier og deres komponenter.

    Molekylær biologisk diagnose av tuberkulose

    Molekylærbiologiske metoder i diagnosen infeksjonssykdommer omfatter i hovedsak metoder basert på manipulering av bakterielle og virale patogener med genomiske materialer for å identifisere spesifikt genetisk materiale - DNA-segmenter med en nukleotidsekvens som er spesifikk for denne arten eller patogenstammer, for å analysere spesifikk DNA-sekvenser i gener som bestemmer patogenes følsomhet for visse medisinske stoffer, samt å analysere funksjonen høraktivitet av visse gener av patogenet. Molekylære biologiske metoder er mye brukt i vitenskapelig forskning og praktisk anvendelse i diagnostisering og kontroll av ulike bakterielle og virusinfeksjoner etter oppdagelsen i 1985 av Kerry Mulllis (Nobelprisvinneren 1989) av polymerasekjedereaksjonen.

    Prinsipper og muligheter for polymerasekjedereaksjonsmetoden

    PCR lar deg amplifisere (multiplisere) in vitro nukleotidsekvensen (patogen-DNA-fragmentet) i flere timer millioner ganger. Gjennomføring av reaksjonen i nærvær av enkeltstrenger av DNA, bestemmer ekstremt høy følsomhet for analysen.

    Nukleotidsekvensen av visse seksjoner i DNA-kjeden bestemmer den genetiske identiteten til mikroorganismen, noe som forklarer PCRs høye spesifisitet.

    Verdien av denne metoden for påvisning og undersøkelse av egenskapene til Mycobacterium tuberculosis skyldes mikroorganismens biologiske egenskaper med svært langsom vekst: fordoblingstiden for Mycobacterium tuberculosis DNA under dyrking er 12-24 timer.

    Prinsippet med PCR-metoden er forsterkning - flere, millioner ganger. multiplikasjon av seksjoner av en spesifikk DNA-sekvens i en mikrobølge med testrør med syklisk repetisjon av de følgende tre trinn i reaksjonen, som hver finner sted i et annet temperaturregime:

    • Trinn I - denaturering av dobbeltstrenget DNA når det oppvarmes med divergensen av dets kjeder;
    • Trinn II - komplementær binding (hybridisering) av primere (primeroligonukleotider) med endepartiene av de strengt spesifikke kjedene valgt for multiplikasjon av DNA-fragmentet;
    • Trinn III - fullføring av kjeden av DNA-fragmentet ved bruk av en termostabil DNA-polymerase.

    For amplifikasjon in vitro må det være mal-DNA-molekyler. fire typer deoksynukleosidtrifosfater (nukleotider) som inneholder de tilsvarende nitrogenbasene: adenin (A), tymin (T), guanin (D), cytosin (C); kunstig syntetiserte frøoligonukleotider (primere) bestående av 18-20 basepar; termostabilt DNA-polymeraseenzym, med et temperaturoptimum på 68-72 oC og magnesiumioner.

    Specificiteten av PCR avhenger av valget av DNA-fragment. I samsvar med dette syntetiseres flankefrøoligonukleotider. Specificiteten av hybridisering og fullføring av DNA-kjeden bestemmes av komplementaritetsprinsippet av de følgende par nitrogenholdige baser: adenin-tymin, guanin-cytosin.

    For å bestemme genomet av mycobacterium tuberculosis-komplekset var det mest effektive mål for amplifisering i de fleste testsystemene DNA fragmentet IS6110, som i de fleste stammer av mycobacterium tuberculosis har et betydelig antall (10-20) gjentagelser i genomet, som gir, sammen med spesifisitet, høy følsomhet for analysen. På samme tid er stammer av Mycobacterium tuberculosis med et lite antall gjentagelser eller fraværet av et IS6110-fragment blitt beskrevet.

    Isolering av DNA-molekyler fra en biologisk prøve

    For å utføre PCR, må patogenes DNA-molekyler isoleres fra biologisk materiale i et minimumsvolum, med en minimums mengde ikke-uoppløselig DNA og forskjellige inhibitorer av enzymet-DNA-polymerasen.

    Prøvepreparering bør utføres under forhold som forhindrer krysskontaminering av prøvene som studeres av utsöndrede DNA-molekyler. For dette formål er det nødvendig å forvirre rommet med ultrafiolett lys, gulvene og arbeidsflatene på bordene og apparatene - klorholdige løsninger. Det er også nødvendig å bruke rene hansker, engangsrør og tips til automatiske pipetter.

    For å isolere DNA fra Mycobacterium tuberculosis fra kliniske prøver (cerebrospinalvæske, bronkial lavage) som ikke inneholder et stort antall leukocytter, celleavfall eller salter, er det nok å sentrifugere prøven ved 3-4000 omdreininger per minutt, tilsett 20-30 μl 2% løsning på sedimentet triton X-100 og varm ved 90 o C i 30 min.

    For fremstilling av sputumprøver er det nødvendig med effektiv fortynning, for hvilken vanligvis 4% natriumhydroksydoppløsning og N-acetyl-L-cystein (NALC) i mengden 50-80 mg pr. Prøve benyttes, avhengig av prøveviskositeten. NALC-løsningen må fremstilles ex tempore eller NALC-pulveret kan tilsettes i tørr form direkte til prøven. Etter fortynning skal prøvene sentrifugeres i 15 minutter ved 3,5-4000 omdreininger per minutt (3000 g) i 50 ml rør med skruehett, dvs. på samme betingelser som anbefales for pre-såing av sputum.

    For ekstraksjon av DNA fra sediment brukes en metode basert på bruken av en 5-6 molar løsning av guanidinisothiocyanat som lyseringsreagens og mikroporøse silikapartikler ("diatoméjord") sorbende DNA-molekyler mer vanlig. Ikke-spesifikke stoffer, inkludert mulige inhibitorer, vaskes deretter i en 2,5 molar løsning av guanidinisotiocyanat og etanolløsning, hvoretter DNA-molekylene desorberes i vann, og disse prøvene blir brukt til PCR. For å forenkle DNA-ekstraksjonsteknologi blir "diatoméjord" ofte erstattet med magnetiske mikropartikler belagt med silika. På samme tid, i stedet for sentrifugering, brukes et spesielt magnetrør for mikrotestrør til å utfelle partikler.

    I Russland har en original metode for immunomagnetisk separasjon av mykobakterier blitt utviklet, etterfulgt av ekstraksjon av patogenens DNA. For immunomagnetisk separasjon av mycobacterium tuberkulose anvendes ferropartikler på 3-5 μm, belagt med silisiumoksyd, til hvilke polyklonale (kanin) antistoffer mot mykobakterier av tuberkulose er festet ved kjemisk binding. Etter alkalisk lysering nøytraliseres sputumprøver med en sur oppløsning av Tris-HCl og inkuberes med en immunomagnetisk sorbent. Deretter oppsamles immunopolypartiklene ved bruk av en magnetisk pinne med en utskiftbar spiss, overført til en mikrovial, utfelt. 20-30 μl av en 2% Triton X-100-oppløsning påføres og oppvarmes i 30 minutter ved 90 oC. Supernatanten brukes som en DNA-mal for PCR-analyse.

    Et vanskelig problem er isoleringen av Mycobacterium tuberculosis DNA fra biopsiprøver. For lys av biopsi brukes enzymet proteinase K ved en sluttkonsentrasjon på 200-500 mg / l ved en temperatur på 56 o med om natten. Deretter tilordne en av de kjente metodene. Et overskudd av ikke-spesifikt DNA i PCR-analyse av biopsiprøver tjener ofte til å hemme reaksjonen, hvilket krever gjentatt ekstraksjon av DNA.

    Resultater Deteksjonsmetoder

    Etter fullføring av reaksjonen identifiseres de amplifiserte patogen-DNA-fragmentene ved bruk av forskjellige metoder.

    En velkjent metode for gelelektroforese. Samtidig identifiseres det oppnådde DNA-fragmentet ved en positiv kontroll, som inneholder det ønskede spesifikke DNA-fragment, eller ved en tidligere kjent størrelse (antall nukleotidpar) av fragmentet, som bestemmes ved bruk av en standard molekylær markør.

    I nærvær av et spesifikt fargestoff, etidiumbromid, innlemmet i dobbeltstrenget DNA. Det syntetiserte DNA-fragmentet detekteres som et bånd som gløder under virkningen av ultrafiolett.

    Størrelsen på DNA-fragmentet, bestemt ved elektroforese av avstanden fra starten, må korrespondere med en kjent molekylvektmarkør eller en positiv kontroll.

    Andre metoder for å bestemme PCR-resultater er basert på hybridisering av enkeltkjede PCR-produkter med en biotin-merket DNA-probe som er komplementær til dem, etterfulgt av deteksjon ved enzymatisk reaksjon, for eksempel ved binding til biotin av et streptavidin-alkalisk fosfataskonjugat.

    Basert på denne typen deteksjon er PCR-analysatorer opprettet der deteksjon av PCR-resultater utføres automatisk som et resultat av å lese den optiske tettheten i prøvene etter at en enzymatisk reaksjon har oppstått.

    Ulempene med disse metodene ligger i mulighetene for intralaboratorisk forurensning med ganske korte fragmenter av DNA-molekyler. Disse molekylene, når de slippes ut i de nylig undersøkte prøvene, blir matrisen for PCR og fører til falske positive resultater.

    I denne forbindelse, for å forhindre falsk positive resultater, er det innført strenge regler for separering og isolering av lokaler: for å isolere DNA fra biologiske prøver; lokaler for påvisning av resultater (elektroforese) fra ren sone. Disse rommene er en sone med sannsynlig forurensning. Et annet isolert område er et rent rom for å introdusere testprøver av DNA i testrør med reaksjonsblandingen for PCR. Til slutt antas det at hovedenheten - DNA-forsterkeren - skal flyttes til et separat, eventuelt kontorlokal.

    For å forhindre forurensning med produktene fra tidligere reaksjoner - med ampikoner inneholder noen PCR-testsystemer i stedet for deoksynukleosidtymidin deoksynukleosidurid, som istedet settes inn i den tilsvarende posisjon under syntese av kjeden in vitro, dvs. Den nitrogenbasiske tymin, som er tilstede i det native DNA, erstattes av uracil. Uracil-DNA-glykosylase, tilsatt til reaksjonsblandingen til materialet som skal analyseres, ødelegger bare forurensende fragmenter med deoksyuridin, men ikke det native analyserte DNA. inneholdende deoksytymidin. Senere oppvarming ved 94 ° C inaktiverer dette enzymet og forstyrrer ikke PCR-amplifikasjon.

    Det er et testsystem basert på isotermisk amplifisering av rRNA, for hvilken revers transkripsjon og syntese av DNA-molekyler utføres først. som i sin tur er en mal for den etterfølgende syntese av RNA-molekyler. Amplikoner av RNA detekteres under anvendelse av en akridin-farget DNA-probe under hybridisering i reaksjonsrøroppløsningen. Denne metoden, i tillegg til høy følsomhet, har fordelen av å utføre analysen i et enkelt reagensrør, som forhindrer forurensning. Ifølge forfatterne når sensitiviteten til denne metoden i respiratoriske prøver 90% med en spesifisitet på 99-100%.

    Nye påvisningsmetoder implementeres i sanntidspatron. Disse metodene preges primært av det faktum at PCR og påvisning av dens resultater utføres samtidig i ett lukket rør. Dette forenkler ikke bare analysemetoden, men forhindrer også forurensning av laboratorierom og testprøver med produkter som går før PCR.

    I sanntids-PCR oppstår deteksjonen av resultatene på grunn av fluorescensen som oppstår ved hybridisering av en fluorogen DNA-probe med et spesifikt DNA-fragment amplifisert under PCR. Strukturen av fluorogene DNA-prober er konstruert på en slik måte at den fluorescerende markør frigjøres som et resultat av en enzymatisk reaksjon eller distansert fra fluorescens-quenchermolekylet bare under spesifikk hybridisering med det ønskede DNA-molekyl amplifisert under PCR. Med en økning i antall molekyler hybridisert med en probe, er økningen i fluorescens til et påvisbart nivå proporsjonal med antall molekyler av det amplifiserte produktet. Siden antall DNA-fragmentmolekyler blir fordoblet under hver PCR-syklus, er det syklusnummer hvorfra fluorescens bestemmes og økt, omvendt proporsjonalt med antall DNA-molekyler i den opprinnelige prøven. Hvis flere forskjellige kjente konsentrasjoner av molekylene i det tilsvarende DNA-fragment av Mycobacterium tuberculosis blir introdusert i reaksjonen som en kalibrator, kan antallet DNA-genomene i det studerte materialet beregnes ved bruk av et dataprogram.

    Hver standardprøve dupliseres. Et kvantitativt kriterium er minimums antall PCR-sykluser som kreves for start og vekst av den påvist fluorescens. Abscissen er antall sykluser; ordinataksen er verdien av fluorescens. Konsentrasjonen av DNA er omvendt proporsjonal med antall sykluser som er nødvendige for utseendet av fluorescens. I vinduene i høyre kolonne (21-32) er sykkelstallene for de respektive konsentrasjoner merket. Forskjeller mellom 10 ganger konsentrasjoner av DNA-fragmenter 10 2 -10 6 ml - 3,2-3,4 sykluser. For to pasienter var konsentrasjonen av IS6110-fragmenter ca. 10 3 / ml og 10 4 / ml. Med hensyn til antall gjentagelser (6-20) av de analyserte fragmentene i genomet av Mycobacterium tuberculosis, er antallet mykobakterier i kliniske prøver omtrent henholdsvis 100 og 1000 celler.

    Bruk av PCR i diagnosen tuberkulose

    PCR-metoden er mest brukt for den akselererte diagnosen tuberkulose - påvisning av mycobacterium tuberculosis i kliniske prøver: sputum. bronkial vasking, pleural ekssudat, urin, cerebrospinalvæske, osteolyse punctates, kvinnelige kjønnsorganer aspirater og ulike biopsi prøver. I en studie i Holland om lag 500 eksemplarer av sputum og bronkiale swabs fra 340 pasienter med en bekreftet diagnose av pulmonell tuberkulose, ble den sammenlignende sensitiviteten til PCR, kultur og smearmikroskopi undersøkt. Sensitiviteten til analysen var henholdsvis 92,6,88,9 og 52,4%. I dette tilfellet var spesifisiteten til alle metoder omtrent 99%.

    En sammenligning ble gjort av deteksjonseffektiviteten av mycobacterium tuberculosis ved smearmikroskopi metoder, såing på Lowenstein-Jensen medium, WASTES test system og PCR analyse. PCR viste en følsomhet på 74,4%, mikroskopi - 33,8%, såing på et tett medium - 48,9% og AVFALL - 55,8%. Gjennomsnittlig detekteringstid for såing på Levenshtein-Jensen medium er 24 dager. AVFALL - 13 dager, PCR - 1 dag.

    Mulighetene for å bruke PCR som en sensitiv og rask metode for å overvåke effekten av behandling for tuberkulose, diskuteres også.

    Deteksjon av Mycobacterium tuberculosis DNA ved PCR med effektiv kjemoterapi bestemmes over lengre tid - i gjennomsnitt 1,7 måneder sammenlignet med bakteriesekresjonen detektert ved fluorescensmikroskopi, og 2,5 måneder sammenlignet med bakteriologisk undersøkelse.

    Diagnose av ekstrapulmonell tuberkulose

    Verdien av PCR som en sensitiv metode er spesielt stor for ekstrapulmonale former, da det er i disse formene at kliniske røntgenmetoder og tradisjonelle bakteriologiske metoder for å bestemme mycobacterium tuberkulose i diagnostiske materialer er ineffektive.

    Ved undersøkelse av urinprøver var resultatene av PCR-analyse positiv hos 16 av 17 pasienter med aktiv tuberkulose i urinveiene og negativ hos 4 pasienter med inaktiv tuberkulose av nyrene og 39 pasienter med ikke-tuberkuløse sykdommer i urinveiene.

    Effektiviteten av PCR-analysen ble demonstrert i studien av benmargsaspirater hos pasienter med feber av uklar genetikk i mistanke om sykdommen tuberkulose. For diagnostisering av tuberkuløs lymfadenitt hos barn ble 102 punkterings aspirat og biopsiprøver av 67 barn med mistanke om tuberkuløs lymfadenitt undersøkt. Positive resultater ble oppnådd: i sanntid PCR - 71,6%. fluorescensmikroskopi - 46,3%. kulturstudier - 41,8%. I en studie av 50 lymfeknudebiopsier hos pasienter med katteskrammesykdom var alle resultater negative. Således ble en 100% spesifisitet av PCR-analysen demonstrert. I samme arbeid, med punkteringsbiopsi av lymfeknuter, ble det vist muligheten for å oppdage M. avium.

    Diagnose av kvinnelig genital tuberkulose med infertilitet er kjent for å være en av de vanskeligste diagnostiske problemene. En studie ved bruk av PCR av endometriebiopsier, endometriale aspirater og væskeprøver fra Douglas-rom hos 14 (56%) av 25 pasienter som ble undersøkt laparoskopisk med mistanke om tuberkulose, viste positive resultater. Ved å bruke smearmikroskopi og kulturstudier ble henholdsvis 1 og 2 oppnådd positive resultater. Disse tilfellene var også PCR positive. De fleste PCR-positive resultater relatert til tilfeller med karakteristiske tegn på tuberkulose i henhold til histologisk undersøkelse; et mindre antall - i tilfelle mistanke om tuberkulose i henhold til laparoskopi. Bare en positiv PCR-analyse ble oppnådd i fravær av laparoskopiske data for tuberkulose.

    Ved diagnostisering av ekstrapulmonale former for tuberkulose har klinikere ofte spørsmål om muligheten for å oppdage patogenet i PCR-studien av blodprøver. Litteraturdata indikerer at DNA-deteksjon av Mycobacterium tuberculosis fra blodprøver er mulig med avanserte former for HIV-infeksjon. Mycobacterium tuberculosis DNA ble detektert bare ved generell tuberkulose av forskjellige organer hos pasienter med transplantert nyre og immunosuppresjon.

    Arteridentifikasjon av mykobakterier

    PCR-metoden kan være ganske effektiv for hurtig identifisering av mycobacterium tuberculosis-komplekset og noen typer ikke-tuberkuløse mykobakterier etter deres første vekst. I dette tilfellet kan bruk av PCR lagre 7-10 dager som kreves for den etterfølgende kulturelle identifikasjonen av et positivt resultat. Forskning ved PCR er teknisk veldig enkel, fordi det ikke krever komplisert prøvebehandling av klinisk materiale for å oppnå høy følsomhet. I studien av 80 positive kulturer i et slikt testsystem (MB VasT. Fra organon-selskapet) var alle positive resultater av PCR-analysen strengt spesifikke og ble utført i 1 dag. For å identifisere andre arter av mykobakterier ved fremstilling av DNA fra organismen kultur hybridisert med spesifikke DNA-prober merket med acridin og stammer som detekteres av utseendet av kjemiluminescens via chemiluminometer eller nitrocellulosestrimler med en visuell vurdering etter hybridisering. Med dette settet identifiseres et begrenset antall arter: Mycobacterium tuberculosis-komplekset. M. avium, M. avium kompleks, M. kansasii og M. gordonae.

    A.Telenti et al. De utviklet også en relativt enkel og rimelig metode for arten identifisering av klinisk viktige mykobakterier basert på PCR og påfølgende behandling med to restriksjonsenzymer (enzymer som har egenskapene til å kutte DNA-molekylet på bestemte punkter). Når dette forsterkes, DNA-fragmentet. kodende varmeskokprotein (65 kDa), hvoretter DNA-fragmentet av 439 nukleotidpar oppnådd ved PCR behandles separat av to enzymer - Bste II og Hae III. Ved bruk av agarosegelelektroforese analyseres de to oppnådde produkter, bestemmer deres størrelser (antall nukleotidpar) ved bruk av et sett med standard DNA-fragmenter (molekylære DNA markører) med en lengde fra 100 til 1000 nukleotidpar. I hver av visse arter (M. tuberculosis, M. avium, M. intracellulare, M. kansasii, M. fortuitum), finnes 2 eller 3 DNA-fragmenter av forskjellige størrelser for hvert restriksjonsenzym. Kombinasjonen av forskjellige dimensjonerte DNA-fragmenter som er oppnådd, muliggjør differensiering av disse artene blant seg selv.

    Teknologien til biologiske DNA-mikrochips utvikles. som vil bidra til å identifisere mer enn 100 typer mykobakterier i en studie.

    Arteridentifikasjon kan også utføres ved bruk av PCR-amplifisering av 16S rRNA-variabelregionen, etterfulgt av sekvensering av amplikonene sammenlignet med den tilsvarende primære struktur, som muliggjør identifisering av mer enn 40 arter av mykobakterier.

    Ved bruk av PCR kan arteridentifikasjon også utføres innenfor mycobacterium tuberculosis-komplekset, inkludert differensiering av M. bovis og M. bovis BCG. For dette analyseres tilstedeværelsen eller fraværet av visse gener i de genomiske områdene av RD1. RD9 og RD10. RD1 er fraværende i M. bovis BCG, men er tilstede i virulente arter, inkludert M. bovis.

    Bestemmelse av medikamentresistens for Mycobacterium tuberculosis ved bruk av PCR

    Oppgavene til molekylære genetiske metoder for å bestemme stoffets følsomhet eller resistens av Mycobacterium tuberculosis blir redusert til identifisering av mutasjoner i bestemte nukleotidsekvenser av kjente gener. Hovedmetodene er basert enten på direkte lesing (sekvensering) av disse sekvensene etter amplifikasjon, eller ved hybridisering av biotin-merkede DNA-fragmenter amplifisert under PCR med DNA-prober. Begge alternativer omfatte det å identifisere nukleotidsubstitusjoner i de sekvenser som ved hjelp av DNA-prober fører til fravær eller ufullstendig hybridisering til en nitrocellulosemembran ved hjelp av enzym-konjugat (streptavidin-alkalisk fosfatase) - Metode LIPA-Rif-TB.

    Fremgangsmåten for måling av fluorescens i DNA-prober lokalt fastet på mikrosteder som er komplementære til kjente mutasjoner i PCR-amplifiserte områder av gener som er ansvarlige for medikamentfølsomhet eller resistens, kalles mikrobiochip-metoden. Den grunnleggende algoritmen for å gjennomføre denne studien er som følger. Etter isolering av DNA fra en klinisk prøve eller kultur av mykobakterier er nødvendig for å utføre PCR-amplifikasjon av relevante fragmenter av rpoB genet er ansvarlig for medikamentsensitivitet til rifampicin eller katG og Inha gener som koder for proteiner med Mycobacterium er ansvarlige for sensitivitet til Isoniazid. PCR-resultatene blir vurdert ved hjelp av agarosegelelektroforese, som bekrefter fremstillingen av de tilsvarende DNA-fragmenter av ønsket lengde. Dette følges av 2. runde PCR for innføring av en fluorescerende etikett i DNA. PCR-resultatene blir igjen bekreftet ved gelelektroforese. Deretter ble hybridisering utført (inkubasjon over natten), etterfulgt av vasking av det resulterende materialet på biochip, som er et stort antall løst i et lite glass plate korte DNA-tråder (prober), som er komplementære til nukleotidsekvenser av medikamentet-følsom type Mycobacterium tuberculosis ved punktene for mulige mutasjoner. samt mutante sekvenser som er ansvarlige for resistens mot stoffet. Ordningen av DNA-prober på platen er strengt bestemt, og nivået av observert fluorescens under hybridisering for å bestemme resultatet ved hjelp av en spesiell leser er innstilt. I denne forbindelse bestemmes resultatene av analysen ved hjelp av et spesielt dataprogram.

    I de siste årene har alternative metoder for å bestemme stoffets følsomhet for Mycobacterium tuberculosis basert på sanntids PCR-teknologi blitt utviklet, slik at disse studiene kan utføres i lukket rørmodus.

    På fig. 13-13 presenterer resultatet av analysen av kliniske kulturer av Mycobacterium tuberculosis ved bestemmelse av resistens mot rifampicin ved bruk av sanntids PCR: 218 - kontrollprøve (følsom for rifampicin); 93 - positiv kontroll for Ser-Trp TCG-TGG mutasjon; 4482 - positiv kontroll for Ser-Leu TCG-TTG mutasjon; 162-322 - eksperimentelle prøver. Resultatet av beregningen av kinetiske amplifikasjonskurver for 4 kanaler: kanal 1: 393 - positiv kontroll for Ser-Trp TCG-TGG-mutasjonen; kanal 2: 4482 - positiv kontroll for Ser-Leu TCG-TTG mutasjonen; 162, 163, 172, 295 - eksperimentelle prøver; kanal 4: kinetiske amplifikasjonskurver for alle prøver involvert i forsøket. Positiv kontroll amplifikasjonsreaksjon. Konklusjoner: Resultatene av analysen viste følgende mutasjoner som bestemmer resistens mot rifampicin: i prøver 162.163.172.295 - Ser-Leu TCG-TTG. Det samme prinsippet brukes til å bestemme stoffresistensen mot isoniazid for katG- og inhA-gener, som bestemmer de hyppigste mutasjonene.

    Strainidentifikasjon av mycobacterium tuberculosis

    Den mest grundig studert metoden for identifisering av stammer av Mycobacterium tuberculosis er en teknikk som kalles restriksjonsfragmentlengde-polymorfisme (RFLP RFLP,. Eller i den engelske versjon), og som er basert på fragmentirovanin (begrensning) av Mycobacterium tuberculosis DNA enzymet PvuII, og fragmentene oppnådd påfølgende hybridisering med visse spesifikke sekvenser for DNA dets gjentagelseselement er IS6110. Intraspesifikk variabilitet er realisert på grunn av det forskjellige antall gjentakelser av IS6110 og deres plassering på DNA. så vel som mangfoldet av avstander mellom bestemte angrepssteder av enzym-restriksjonen (restriksjonssteder) og elementet IS6110. Denne teknologien er svært komplisert og tidkrevende. Etter behandling med DNA ekstrahert fra en kultur av Mycobacterium tuberculosis, blir gelelektroforese utført med et restriksjonsenzym, og deretter overført DNA-fragmenter med forskjellige lengder på en nitrocellulosemembran, hybridisering ble utført med fragmenter av IS6110-element og detekteres ved hjelp av enzymatiske reaksjoner. Det resulterende spesifikke mønsteret av bånd karakteriserer DNA av en spesifikk stamme av Mycobacterium tuberculosis. Ved hjelp av dataanalyse avslørte stammenes identitet eller tilhørighet. Selv om RFLP-metoden er den mest diskriminerende, dvs. avslører det største antallet forskjeller i de analyserte stammene, det er ineffektivt med et lite antall (mindre enn 5) av IS6110-gjentakelser observert i noen stammer. På fig. 13-14 presenterer resultatene av RFLP-typing av stammene.

    Et alternativ kan være metoden for spoligotyping (spoligotyping) - en analyse av polymorfismen av spacer-DNA-sekvenser - mellomliggende mellom direkte gjentagelser av DR-regionen. Ved utføring av spoligotyping av stammer utføres PCR med primere som begrenser DR-regionen, hvoretter fragmenter av forskjellige lengder dannes, som hybridiserer med variable mellomliggende regioner av DNA. Analyse av avstandssekvensene til DR-regionen presenteres. Ifølge forskere er det enklere, mer produktivt og egnet for primær screening av stammer og en foreløpig epidemiologisk analyse, samt studiet av direkte klinisk materiale.

    Tydeligvis er en mer effektiv og teknisk tilgjengelig metode VNTR (forkortelse av engelske ord), eller en metode for å bestemme det variable antall eksakte tandem-gjentagelser i DNA av Mycobacterium tuberculosis. Denne metoden er bare basert på bruk av PCR og krever ikke ytterligere manipulasjoner. Siden antall tandem-gjentagelser i forskjellige stammer og i forskjellige steder er forskjellige, blir fragmenter av forskjellige størrelser bestemt og analysert på det resulterende elektroforegrammet av PCR-produkter. Ifølge forskerne oppnås en større grad av diskriminering av stammer ved hjelp av VNTR enn med RFLP-metoden.

    I de senere årene har det blitt lagt stor vekt på spredningen av Mycobacterium tuberculosis-stammer fra W-Beijing-familien (noen ganger kalles de Beijing-stammen), som i stor grad er narkotikabestandige.

    Grunnleggende krav til kvaliteten på molekylærbiologiske studier

    Grunnleggende regulatoriske dokumenter for PCR

    Bestilling fra Russlands helsedepartement: nr. 45 datert 7. februar 2000. nr. 109 datert 21. mars 2003. nr. 64 datert 21. februar 2000. Metodiske retningslinjer: 1.3.1888-04 "Arbeidsorganisasjon under PCR-studier av materiale infisert med patogen biologisk agenter av III-IV-patogenitetsgrupper "; 1.3.1794-03 "Arbeidsorganisasjon under PCR-studier av materiale smittet med mikroorganismer av I-II-patogenitetsgruppene". 2003.; 3.5.5.1034-01 "Desinfeksjon av testmaterialet infisert med bakterier av gruppe I-IV-patogenitet ved bruk av PCR-metoden", 2001. Vedlegg 11 til Instruksjonen om enhetlige metoder for mikrobiologisk forskning i påvisning, diagnostisering og behandling av tuberkulose

    Personalet

    Leger fra klinisk laboratoriediagnostikk, bakteriologer, virologer, biologer fra det kliniske diagnostiske laboratoriet, samt spesialister med videregående medisinsk utdanning som har bestått spesialiseringen og avansert opplæring på foreskrevet måte, kan utføre molekylærbiologiske studier.

    Enhetslokaler laboratorium

    Følgende laboratoriefasiliteter er nødvendige:

    • Prøvebehandlingsområdet er et laboratorium tilpasset arbeid med infeksjonsmidler i gruppe III-IV av patogenitet, i samsvar med metodologiske retningslinjer 13.1888-04.
    • Sone for fremstilling av reaksjonsblandinger PCR - laboratorierom, som gir beskyttelse mot intern laboratorieforurensning - "ren" sonen.
    • • Hvis elektroforese eller hybridisering brukes til å analysere PCR-produkter. laboratorierommet hvor de forplantede DNA-fragmentene ekstraheres fra amplifikasjonsrøret og følgelig kan frigjøres i miljøet, i samsvar med kravene til PCR-laboratorier (Retningslinjer 1.3.1794-03, Retningslinjer 1.3.1888-04) må være helt isolert fra lokalene som er angitt i de foregående avsnittene. Bevegelsen fra elektroforeseområdet til prøvebehandlingssonen og "ren" sonen til ethvert personell, utstyr, materialer og gjenstander, samt luftoverføring gjennom ventilasjonssystemet eller som følge av utkast bør utelukkes. Denne sonen er ikke nødvendig for fluorimetrisk deteksjon av PCR-produkter.
    • Rom for dokumentasjon og behandling av resultater er utstyrt med datamaskiner og nødvendig kontorutstyr. Utstyret kan plasseres i dette rommet for å oppdage PCR-produkter uten å åpne røret. - Fluorescerende PCR-detektorer og termocyklere for sanntids-PCR.

    Sanitære og epidemiologiske krav til primær behandling av sputum ligner de vanlige mikrobiologiske kravene til arbeid med mykobakterier av tuberkulose.

    Komplett sett med laboratorieutstyr for PCR-diagnostikk

    Laboratoriepakken inneholder utstyr for følgende rom.

    • Prøveberedningsrommet inneholder følgende utstyr: laminar II-beskyttelsesklasse "SP-1.2": en solid-state termostat med oppvarmet lokk for Eppendorf-type rør; mikrocentrifuge ved 13 000 rpm; sentrifuge ("vortex"); et kjøleskap med et temperaturområde fra -20 ° C til +10 ° C; variable volum pipetter fra Proline serien; pumpe med OM-1 kolbefelle; pipettestativ; stativ arbeidsplass 200x0,5 ml; stativ arbeidsplass 50x1,5 ml; stativer for lagringsrør 80x1,5 ml;
    • rom for fremstilling av reaksjonsblandingen: PCR-boks med beskyttende kammer ("Laminar-C, 110 cm); sentrifuge - "Vortex"; Variabel volum pipetter fra Professional-serien; pipettestativ; stativ arbeidsplass 200x0,2 ml; stativer for lagringsrør 80x1,5 ml; et kjøleskap med et temperaturområde på -20 o C til + 10 o C;
    • elektroforese rom: et kammer for horisontal elektroforese; strømforsyning; transilluminator;
    • DNA-forsterker eller analysator av nukleinsyrer (sanntids-PCR) med en datamaskin og programvare; kan plasseres i et hvilket som helst ledig rom. Hvis du bruker PCR-teknologi i sanntid. elektroforese rom er ikke nødvendig.

    Ekstern kvalitetskontroll

    For tillit til å oppnå objektivt pålitelige resultater, bør laboratorier delta i systemet med ekstern kvalitetsvurdering av laboratorieforskning.

    Deltakere i kvalitetsstyringssystemet mottar; 12 ampuller med lyofiliserte suspensjoner av bakterielle celler, hvorav to inneholder E. coli E. coli, 3 ampuller med mycobacterium tuberculosis (avirulent stamme) ved en konsentrasjon på 10 2 / ml; 3 ampuller med celler av en lignende stamme i en konsentrasjon på 10 4 / ml; 2 ampuller med ikke-tuberkuløse mykobakterier M. avium-intracellulare og M. kansasii i en konsentrasjon på 10 5 / ml.

    Distribuerte tester for ekstern kvalitetsvurdering er forhåndsprøvd i to uavhengige laboratorier med stor erfaring på dette feltet.